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如何正確溶解與稀釋ELISA標(biāo)準(zhǔn)品,?
閱讀:527 發(fā)布時間:2021-5-26ELISA標(biāo)準(zhǔn)曲線是結(jié)果計算的尺子,,標(biāo)準(zhǔn)品是ELISA 實(shí)驗(yàn)成功與否的關(guān)鍵點(diǎn)。怎樣正確溶解,、稀釋標(biāo)準(zhǔn)品呢?
1. 粉末標(biāo)準(zhǔn)品短暫離心,,讓因運(yùn)輸沾到管蓋,、管壁的標(biāo)準(zhǔn)品沉到管底。
2. 根據(jù)瓶標(biāo)簽加入一定體積的蒸餾水,,加水后輕柔渦旋震蕩,室溫靜置溶解 10-30min,,讓粉末*溶解。
注意:加水后暫不用移液槍吹吸,,避免蛋白未溶解,,槍頭帶出部分蛋白,,待*溶解后可吹吸或渦旋振蕩混勻,。
3. 標(biāo)準(zhǔn)品梯度稀釋:
(1)標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液的選擇:
若血清、血漿,、組織勻漿樣本,用試劑盒中的標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液,,梯度稀釋標(biāo)準(zhǔn)品。
若細(xì)胞上清樣本,,建議用細(xì)胞培養(yǎng)基梯度稀釋標(biāo)準(zhǔn)品,。
(2)耗材準(zhǔn)備:準(zhǔn)備8個1.5Ml離心管,寫上S1-S7,、空白。
(3)梯度稀釋:根據(jù)說明書,,每管加入等體積的標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液(培養(yǎng)基),。吸取同體積溶解好的標(biāo)準(zhǔn)品到S1管中,,吹打10次混勻,渦旋5S,。從S1管中吸取同體積溶液到 S2管,吹打10次混勻,,渦旋5s,。同法稀釋S3-S7濃度。
(4)空白: 標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液(培養(yǎng)基)作為空白即零濃度,。
注意:梯度稀釋標(biāo)準(zhǔn)品時,渦旋震蕩混勻后可短暫離心,,讓到蓋子、壁上的液體到管底,,再開始稀釋下個濃度,。
標(biāo)準(zhǔn)品溶解,、梯度稀釋是ELISA實(shí)驗(yàn)關(guān)鍵點(diǎn),按以上方法梯度稀釋就可,!