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用鑒定試劑盒做微生物生化鑒定操作流程與注意事項
閱讀:2045 發(fā)布時間:2021-5-17生化鑒定試劑盒HiBio-ID™,,試劑盒包含生化鑒定卡,、輔助試劑、結(jié)果詮釋表和標準菌種表,。一個生化鑒定卡上集成了12種或24種生化試驗,,將反應后的顯色結(jié)果與《結(jié)果詮釋表》、《菌種標準表》比對后,,從而對菌種作出鑒定,。
操作流程:
1,準備接種液
①待測菌株需要先分離純化,。只有純化的菌株才能用于檢測,。可用普通培養(yǎng)基如營養(yǎng)瓊脂(#M001)或適合的鑒別培養(yǎng)基分離菌株,。(具體培養(yǎng)基以說明書為準)
②挑取單個菌落,,接種到5ml腦心浸出液肉湯,在35-37℃培養(yǎng)4-6小時,,直到菌液濁度達到產(chǎn)品說明書上的要求,。一些苛養(yǎng)菌可能需要孵育6小時以上。在這種情況下,,孵育應使接種液濁度達到OD值或McFarland濁度標準,。
③遵循產(chǎn)品說明書的要求操作。
注意:如果接種液濁度<0.1OD或0.5 McFarland標準,,可能會得到錯誤的假陰性結(jié)果,。
2,接種
①無菌打開試劑盒,,撕去密封箔,。
②采用表面接種方法,在鑒定卡上每孔加50μl上述接種液,。每孔用接種環(huán)涂抹接種,。
3,孵育
HiBio-ID™生化鑒定卡中,,貨號為KB001--KB014的產(chǎn)品,,均在35℃±2℃培養(yǎng)18-24小時,只有KB006例外,,需在室溫(22-25℃)孵育48-72小時,。
4,試劑
必要時需要添加其他顯色試劑,,培養(yǎng)結(jié)束后,,個別微孔需要加入1-2滴顯色劑,等待幾秒鐘或幾分鐘。顏色發(fā)生變化,。
5,,讀取結(jié)果
人工讀取結(jié)果:顯色結(jié)果與《結(jié)果詮釋表》比對,確定是否存在陽性反應,。再根據(jù)《菌種標準表》完成鑒定/或用HiBio-ID™Readers生化鑒定儀鑒定,。
注意事項:
1. 試驗前,將試劑盒從冰箱取出,,放置在室溫,。
2. 某些菌的糖發(fā)酵可能不顯著,這時可記錄為±,,孵育延長至48小時,。之后顯示為橘黃色則為陰性。
3. 對于賴氨酸和鳥氨酸脫羧試驗,,孵育可能需要延長至48小時,。
4. 如果菌種出現(xiàn)矛盾的結(jié)果,可能因為菌種突變或用于分離培養(yǎng)的培養(yǎng)基的緣故,。