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技術(shù)文章

用鑒定試劑盒做微生物生化鑒定操作流程與注意事項(xiàng)

閱讀:1862          發(fā)布時(shí)間:2021-5-17

生化鑒定試劑盒HiBio-ID™,,試劑盒包含生化鑒定卡、輔助試劑,、結(jié)果詮釋表和標(biāo)準(zhǔn)菌種表,。一個(gè)生化鑒定卡上集成了12種或24種生化試驗(yàn),將反應(yīng)后的顯色結(jié)果與《結(jié)果詮釋表》,、《菌種標(biāo)準(zhǔn)表》比對(duì)后,,從而對(duì)菌種作出鑒定。

操作流程:

1,,準(zhǔn)備接種液

①待測(cè)菌株需要先分離純化,。只有純化的菌株才能用于檢測(cè)??捎闷胀ㄅ囵B(yǎng)基如營養(yǎng)瓊脂(#M001)或適合的鑒別培養(yǎng)基分離菌株,。(具體培養(yǎng)基以說明書為準(zhǔn))

②挑取單個(gè)菌落,接種到5ml腦心浸出液肉湯,,在35-37℃培養(yǎng)4-6小時(shí),,直到菌液濁度達(dá)到產(chǎn)品說明書上的要求。一些苛養(yǎng)菌可能需要孵育6小時(shí)以上,。在這種情況下,,孵育應(yīng)使接種液濁度達(dá)到OD值或McFarland濁度標(biāo)準(zhǔn),。

③遵循產(chǎn)品說明書的要求操作。

注意:如果接種液濁度<0.1OD或0.5 McFarland標(biāo)準(zhǔn),,可能會(huì)得到錯(cuò)誤的假陰性結(jié)果,。

2,接種

①無菌打開試劑盒,,撕去密封箔。

②采用表面接種方法,,在鑒定卡上每孔加50μl上述接種液,。每孔用接種環(huán)涂抹接種。

3,,孵育

HiBio-ID™生化鑒定卡中,,貨號(hào)為KB001--KB014的產(chǎn)品,均在35℃±2℃培養(yǎng)18-24小時(shí),,只有KB006例外,,需在室溫(22-25℃)孵育48-72小時(shí)。

4,,試劑

必要時(shí)需要添加其他顯色試劑,,培養(yǎng)結(jié)束后,個(gè)別微孔需要加入1-2滴顯色劑,,等待幾秒鐘或幾分鐘,。顏色發(fā)生變化。

5,,讀取結(jié)果

人工讀取結(jié)果:顯色結(jié)果與《結(jié)果詮釋表》比對(duì),,確定是否存在陽性反應(yīng)。再根據(jù)《菌種標(biāo)準(zhǔn)表》完成鑒定/或用HiBio-ID™Readers生化鑒定儀鑒定,。

注意事項(xiàng):

1. 試驗(yàn)前,,將試劑盒從冰箱取出,放置在室溫,。

2. 某些菌的糖發(fā)酵可能不顯著,,這時(shí)可記錄為±,孵育延長至48小時(shí),。之后顯示為橘黃色則為陰性,。

3. 對(duì)于賴氨酸和鳥氨酸脫羧試驗(yàn),孵育可能需要延長至48小時(shí),。

4. 如果菌種出現(xiàn)矛盾的結(jié)果,,可能因?yàn)榫N突變或用于分離培養(yǎng)的培養(yǎng)基的緣故。

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