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小鼠ELISA檢測試劑盒操作步驟使用
閱讀:746 發(fā)布時間:2021-3-30小鼠ELISA檢測試劑盒標本要求:
1. 血清:室溫血液自然凝固10-20分鐘,,離心20分鐘左右(2000-3000轉/分),。仔細收集上清,,保存過程中如出現(xiàn)沉淀,,應再次離心。
2. 血漿:應根據(jù)標本的要求選擇EDTA或檸檬酸鈉作為抗凝劑,,混合10-20分鐘后,,離心20分鐘左右(2000-3000轉/分)。仔細收集上清,,保存過程中如有沉淀形成,,應該再次離心。
3. 尿液:用無菌管收集,,離心20分鐘左右(2000-3000轉/分),。仔細收集上清,保存過程中如有沉淀形成,,應再次離心,。胸腹水、腦脊液參照實行,。
4. 細胞培養(yǎng)上清:檢測分泌性的成份時,,用無菌管收集,。離心20分鐘左右(2000-3000轉/分)。仔細收集上清,。檢測細胞內的成份時,,用PBS(PH7.2-7.4)稀釋細胞懸液,細胞濃度達到100萬/ml左右,。通過反復凍融,,以使細胞破壞并放出細胞內成份。離心20分鐘左右(2000-3000轉/分),。仔細收集上清,。保存過程中如有沉淀形成,應再次離心,。
5. 組織標本:切割標本后,,稱取重量。加入一定量的PBS,,PH7.4,。用液氮迅速冷凍保存?zhèn)溆谩吮救诨笕匀槐3?-8℃的溫度,。加入一定量的PBS(PH7.4),,用手工或勻漿器將標本勻漿充分。離心20分鐘左右(2000-3000轉/分),。仔細收集上清,。分裝后一份待檢測,其余冷凍備用,。
6. 標本采集后盡早進行提取,,提取按相關文獻進行,提取后應盡快進行實驗,。若不能馬上進行試驗,,可將標本放于-20℃保存,但應避免反復凍融.
7. 不能檢測含NaN3的樣品,,因NaN3抑制辣根過氧化物酶的(HRP)活性,。
小鼠ELISA檢測試劑盒操作步驟:
產品僅用于科研實驗開始前,,請?zhí)崆芭渲煤盟性噭?,試劑或樣品稀釋時,均需混勻,,混勻時盡量避免起泡,。如樣品濃度過高時,用樣品稀釋液進行稀釋,,以使樣品符合試劑盒的檢測范圍,。
1. 加樣:分別設空白孔,、待測樣品孔??瞻卓准訕悠废♂屢?00μl,,余孔加待測樣品100μl,注意不要有氣泡,,加樣將樣品加于酶標板孔底部,,盡量不觸及孔壁,輕輕晃動混勻,,酶標板加上蓋或覆膜,,37℃反應120分鐘。
2. 棄去液體,,甩干,,不用洗滌。每孔加辣根過氧化物酶標記抗小鼠IgG工作液
100μl(取1μl生物素標記抗體加99μl生物素標記抗體稀釋液的比例配制,,輕輕混勻,,在使用前一小時
3. 溫育60分鐘后,棄去孔內液體,,甩干,,洗板5次,每次浸泡1-2分鐘,,350μl/每孔,,甩干。
4. 依序每孔加底物溶液90μl,,37℃避光顯色(30分鐘內,,此時肉眼可見孔內有明顯藍色,即可終止),。
5. 依序每孔加終止溶液50μl,,終止反應(此時藍色立轉黃色)。終止液的加入順序應盡量與底物液的加入順序相同,。為了保證實驗結果的準確性,,底物反應時間到后應盡快加入終止液。
6. 用酶聯(lián)儀在450nm波長依序測量各孔的光密度(OD值),。 在加終止液后15分鐘以內進行檢測,。