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人胚腎細(xì)胞使用注意方法
閱讀:227 發(fā)布時(shí)間:2021-3-23人胚腎細(xì)胞使用方法:
收到細(xì)胞后,請(qǐng)按照以下方法進(jìn)行操作,。
1. 取出25cm2培養(yǎng)瓶,,75%酒精消毒,拆下封口膜,,放入37℃,,5% CO2細(xì)胞培養(yǎng)箱中靜置6-8小時(shí)或者過夜,以穩(wěn)定細(xì)胞狀態(tài),。
2. 待細(xì)胞達(dá)到80%匯合時(shí)準(zhǔn)備進(jìn)行傳代培養(yǎng),。
3. 細(xì)胞傳代
1、吸出25cm2培養(yǎng)瓶中的培養(yǎng)基,,用PBS清洗細(xì)胞一次,;
2、 添加0.125%胰蛋白酶消化液約1mL至培養(yǎng)瓶中,,37℃溫浴3min左右,;倒置顯微鏡下觀察,待細(xì)胞回縮變圓后吸棄消化液,,再加入*培養(yǎng)液終止消化,;
3、 用吸管輕輕吹打混勻,,按1:2或1:3等適當(dāng)?shù)谋壤M(jìn)行接種傳代,,然后補(bǔ)充新鮮的*培養(yǎng)基至5mL,放入37℃,,5% CO2細(xì)胞培養(yǎng)箱中培養(yǎng),;
4、待細(xì)胞*貼壁后,,培養(yǎng)觀察,。之后每隔2-3天更換新鮮的*培養(yǎng)基,。
人胚腎細(xì)胞注意事項(xiàng):
1. 收到細(xì)胞后首先觀察細(xì)胞瓶是否完好,培養(yǎng)液是否有漏液,、渾濁等現(xiàn)象,,若有上述現(xiàn)象發(fā)生請(qǐng)及時(shí)和我們聯(lián)系。
2. 仔細(xì)閱讀細(xì)胞說明書,,了解細(xì)胞相關(guān)信息,,如細(xì)胞形態(tài)、所用培養(yǎng)基,、血清比例,、所需細(xì)胞因子等。
3. 請(qǐng)用相同條件的培養(yǎng)基用于細(xì)胞培養(yǎng),。培養(yǎng)瓶內(nèi)多余的培養(yǎng)基可收集備用,,細(xì)胞傳代時(shí)可以一定比例和自備的培養(yǎng)基混合,使細(xì)胞逐漸適應(yīng)培養(yǎng)條件;建議使用派瑞金的*培養(yǎng)基,。
4. 建議收到細(xì)胞后前3天各拍幾張細(xì)胞照片,,記錄細(xì)胞狀態(tài)。
5. 該細(xì)胞只能用于科研,,不得用于臨床應(yīng)用,。