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熒光-PCR法原理與技術(shù)原理
閱讀:2310 發(fā)布時(shí)間:2021-2-25熒光-PCR法原理:
所謂實(shí)時(shí)熒光定量PCR技術(shù),是指在PCR反應(yīng)體系中加入熒光基團(tuán),,利用熒光信號積累實(shí)時(shí)監(jiān)測整個(gè)PCR進(jìn)程,,后通過標(biāo)準(zhǔn)曲線對未知模板進(jìn)行定量分析的方法。
熒光-PCR法技術(shù)原理:
將標(biāo)記有熒光素的Taqman探針與模板DNA混合后,,完成高溫變性,,低溫復(fù)性,適溫延伸的熱循環(huán),,并遵守聚合酶鏈反應(yīng)規(guī)律,,與模板DNA互補(bǔ)配對的Taqman探針被切斷,熒光素游離于反應(yīng)體系中,,在特定光激發(fā)下發(fā)出熒光,,隨著循環(huán)次數(shù)的增加,被擴(kuò)增的目的基因片段呈指數(shù)規(guī)律增長,,通過實(shí)時(shí)檢測與之對應(yīng)的隨擴(kuò)增而變化熒光信號強(qiáng)度,,求得Ct值,同時(shí)利用數(shù)個(gè)已知模板濃度的標(biāo)準(zhǔn)品作對照,,即可得出待測標(biāo)本目的基因的拷貝數(shù),。
熒光-PCR法服務(wù)流程:
1.客戶認(rèn)真寫好訂單,提供待檢基因相關(guān)信息;
2.簽訂技術(shù)服務(wù)合同,,支付預(yù)付款(30-50%);
3.設(shè)計(jì)合成定量PCR引物(或客戶提供文獻(xiàn)引物委托本公司合成);
4.DNA/RNA的抽提、定量,、RNA反轉(zhuǎn)錄;
5.PCR預(yù)實(shí)驗(yàn),,主要檢測引物的特異性和擴(kuò)增效率;
6.正式定量實(shí)驗(yàn):對所有樣品上機(jī)檢測;
7.實(shí)驗(yàn)結(jié)果和數(shù)據(jù)分析,形成報(bào)告,。