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技術(shù)文章

小鼠ELISA檢測試劑盒操作步驟及性能

閱讀:280          發(fā)布時間:2021-1-28

小鼠ELISA檢測試劑盒操作步驟

使用前,,將所有試劑充分混勻,。不要使液體產(chǎn)生大量的泡沫,以免加樣時加入大量的氣泡,,產(chǎn)生加樣上的誤差,。

根據(jù)待測樣品數(shù)量加上標準品的數(shù)量決定所需的板條數(shù)。每個標準品和空白孔建議做復(fù)孔,。每個樣品根據(jù)自己的數(shù)量來定,能使用復(fù)孔的盡量做復(fù)孔,。標本用標本稀釋液1:1稀釋后加入50ul于反應(yīng)孔內(nèi)。

加入稀釋好后的標準品50ul于反應(yīng)孔,、加入待測樣品50ul于反應(yīng)孔內(nèi),。立即加入50ul的生物素標記的抗體,。蓋上膜板,,輕輕振蕩混勻,,37℃溫育1小時。

甩去孔內(nèi)液體,,每孔加滿洗滌液,,振蕩30秒,甩去洗滌液,,用吸水紙拍干,。重復(fù)此操作3次。如果用洗板機洗滌,,洗滌次數(shù)增加一次,。

每孔加入80ul的親和鏈酶素-HRP,輕輕振蕩混勻,,37℃溫育30分鐘,。

甩去孔內(nèi)液體,每孔加滿洗滌液,,振蕩30秒,,甩去洗滌液,用吸水紙拍干,。重復(fù)此操作3次,。如果用洗板機洗滌,洗滌次數(shù)增加一次,。

每孔加入底物A,、B各50ul,輕輕振蕩混勻,,37℃溫育10分鐘,。避免光照。

取出酶標板,,迅速加入50ul終止液,,加入終止液后應(yīng)立即測定結(jié)果。

在450nm波長處測定各孔的OD值,。

6號標準品以上的結(jié)果為非線性的,,根據(jù)此標準曲線無法得到的結(jié)果。

小鼠ELISA檢測試劑盒試劑盒性能

1. 靈敏度:小的檢測濃度小于1號標準品,。稀釋度的線性,。樣品線性回歸與預(yù)期濃度相關(guān)系數(shù)R值為0.990。

2. 特異性:不與其它細胞因子反應(yīng),。

3. 重復(fù)性:板內(nèi),、板間變異系數(shù)均小于10%,。

結(jié) 果 判 斷 與 分 析

1、儀器值:于波長450nm的酶標儀上讀取各孔的OD值

2,、以吸光度OD值為縱坐標(Y),,相應(yīng)的ALT標準品濃度為橫坐標(X),做得相應(yīng)的曲線,,樣品的ALT含量可根據(jù)其OD值由標準曲線換算出相應(yīng)的濃度,。

3、檢測值范圍:0-240IU/L

4,、敏感度: 0.1 IU/L

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