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技術(shù)文章

其他生化試劑注意事項(xiàng)與步驟方法

閱讀:473          發(fā)布時(shí)間:2021-1-6

其他生化試劑操作步驟 :

1.用蓋片鑷其他生化試劑將蓋玻片自75%乙醇中取出,,用無(wú)菌絲綢布擦拭干凈,,不要用紗布,; 

2.將蓋玻片輕輕放入6孔培養(yǎng)板(每孔一片)或培養(yǎng)皿中(每個(gè)平皿可放置2-3片); 

3.在距離紫外燈直射范圍內(nèi)20-30 厘米處照射2-3小時(shí),; 

4.將經(jīng)過(guò)計(jì)數(shù)的細(xì)胞懸浮液移入培養(yǎng)板中,,使蓋玻片*浸在培養(yǎng)液中,; 

5.將培養(yǎng)板在5% CO2水浴孵箱中37℃孵育2-3天,當(dāng)貼壁細(xì)胞生長(zhǎng)至覆蓋培養(yǎng)板底部2/3面積時(shí),,將培養(yǎng)板取出,,用蓋片鑷輕輕取出蓋玻片,用蒸餾水漂洗后即可進(jìn)行快速固定以及免疫細(xì)胞化學(xué)檢測(cè),。

其他生化試劑注意事項(xiàng):

       1. 其他生化試劑解凍與存放:-20℃取出后建議放入2~8℃冰箱中解凍約,,每隔一段時(shí)間輕輕搖晃均勻,,不可直接放入溫度較高處解凍,,避免因溫度改變太大,造成蛋白質(zhì)凝集而出現(xiàn)沉淀,,血清的質(zhì)量下降,。若短期無(wú)法用完一瓶,建議無(wú)菌分裝,再放回冷凍,,避免反復(fù)凍融,。4℃長(zhǎng)時(shí)間保存后血清中的變性脂蛋白及纖維蛋白,形成絮狀物質(zhì)變差,。

      2. 其他生化試劑是否滅活:加熱可滅活血清中補(bǔ)體系統(tǒng),,在極少數(shù)情況下(培養(yǎng)ES細(xì)胞,平滑肌細(xì)胞時(shí))建議滅活,,在培養(yǎng)其余細(xì)胞時(shí)不建議滅活血清,。血清滅活非常容易產(chǎn)生沉淀,如必須滅活請(qǐng)按56℃,,30 min,,輕微搖晃原則操作,滅活溫度高,、時(shí)間長(zhǎng),、搖晃不均都容易產(chǎn)生沉淀。

      3.其他生化試劑培養(yǎng)基:無(wú)血清培養(yǎng)基在結(jié)果重復(fù)性,、細(xì)胞體外分化方面有優(yōu)勢(shì),,但是,血清仍然是培養(yǎng)液中基本的添加物,,尤其是在原代培養(yǎng)或細(xì)胞生長(zhǎng)狀態(tài)不良時(shí),,常常會(huì)先使用有血清的培養(yǎng)液進(jìn)行培養(yǎng),待細(xì)胞生長(zhǎng)旺盛后再換成無(wú)血清培養(yǎng)液,。

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