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技術(shù)文章

ELISA試劑盒簡介

閱讀:210          發(fā)布時間:2020-7-6

ELISA試劑盒操作步驟:

1.加樣:標準品設(shè)定5個濃度點10個孔,每個濃度設(shè)定平行孔,,加入50微升不同濃度的標準品,空白孔設(shè)定1個孔加入50微升蒸餾水(空白對照孔不加樣品及酶標試劑,,其余各步操作相同),、待測樣品孔,在酶標包被板上待測樣品孔中先加樣品稀釋液40μl,,然后再加待測樣品10μl(樣品終稀釋度為5倍),。加樣將樣品加于酶標板孔底部,,盡量不觸及孔壁,輕輕晃動混勻,。

2.溫育:用封板膜封板后置37℃溫育30分鐘,。

3.配液:將30(48T的20倍)倍濃縮洗滌液用蒸餾水30(48T的20倍)倍稀釋后備用。

4.洗滌:小心揭掉封板膜,,棄去液體,,甩干,每孔加滿洗滌液,,靜置30秒后棄去,,如此重復(fù)5次,拍干,。

5.加酶:每孔加入酶標試劑50μl,,空白孔除外。

6.溫育:操作同2,。

7.洗滌:操作同4,。

8.顯色:每孔先加入顯色劑A50μl,再加入顯色劑B50μl,,輕輕震蕩混勻,,37℃避光顯色15分鐘. 

9.終止:每孔加終止液50μl,終止反應(yīng)(此時藍色立轉(zhuǎn)黃色),。

10.測定:以空白空調(diào)零,,450nm波長依序測量各孔的吸光度(OD值)。 測定應(yīng)在加終止液后15分鐘以內(nèi)進行,。

ELISA試劑盒實驗注意事項:

1.試劑盒從冷藏環(huán)境中取出應(yīng)在室溫平衡15-30分鐘后方可使用,,酶標包被板開封后如未用完,板條應(yīng)裝入密封袋中保存,。

2.濃洗滌液可能會有結(jié)晶析出,,稀釋時可在水浴中加溫助溶,洗滌時不影響結(jié)果,。

3.各步加樣均應(yīng)使用加樣器,,并經(jīng)常校對其準確性,以避免試驗誤差,。一次加樣時間更好控制在5分鐘內(nèi),,如標本數(shù)量多,推薦使用排槍加樣,。

4.請每次測定的同時做標準曲線,,好做復(fù)孔。如標本中待測物質(zhì)含量過高(樣本OD值大于標準品孔孔的OD值),,請先用樣品稀釋液稀釋一定倍數(shù)(n倍)后再測定,,計算時請后乘以總稀釋倍數(shù)(×n×5),。

5.封板膜只限一次性使用,以避免交叉污染,。

6.底物請避光保存,。

7.嚴格按照說明書的操作進行,試驗結(jié)果判定必須以酶標儀讀數(shù)為準.

8.所有樣品,,洗滌液和各種廢棄物都應(yīng)按傳染物處理。

9.本試劑不同批號組分不得混用,。

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