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                                小鼠70kDa熱休克蛋白5elisa檢測(cè)試劑操作方法

 

    2020新年到了,，俺不太會(huì)說(shuō)話,，。俺就是想祝您11年更干啥啥中意,，想啥啥成,，身體倍棒，賊多,，你數(shù)錢(qián)數(shù)到累,，祝身體健康!新年快樂(lè)!接下來(lái)小編介紹小鼠70kDa熱休克蛋白5elisa檢測(cè)試劑操作方法。

間接法(檢測(cè)未知抗體
1,、用包被緩沖液將已知抗原稀釋至1-10ug/ml,， 每孔加0.1ml，4℃過(guò)夜,。次日洗滌3次,。
2、加樣：加一定稀釋的待檢樣品(未知抗體)0.05ml于上述已包被之反應(yīng)孔中,置37℃孵育1小時(shí),洗滌,。(同時(shí)做空白,、陰性及陽(yáng)性孔對(duì)照)
3、加酶標(biāo)抗體：于反應(yīng)孔中,，加入新鮮稀釋的酶標(biāo)第二抗體(抗抗體)0.05ml,，37℃孵育30-60分鐘，洗滌,zui后一遍用DDW洗滌,。
4,、加底物液顯色：于各反應(yīng)孔中加入臨時(shí)配制的TMB底物溶液0.1ml，37℃ 10～30分鐘,。
5,、終止反應(yīng)：于各反應(yīng)孔中加入2M硫酸0.05ml
6、結(jié)果判定：可于白色背景上,，直接用肉眼觀察結(jié)果：反應(yīng)孔內(nèi)顏色越深,，陽(yáng)性程度越強(qiáng)，陰性反應(yīng)為無(wú)色或極淺,，依據(jù)所呈顏色的深淺,，以“+”,、“-”號(hào)表示。也可測(cè)OD值：在ELISA檢測(cè)儀上,，于450nm(若以ABTS顯色,，則410nm)處，以空白對(duì)照孔調(diào)零后測(cè)各孔OD值,，若大于規(guī)定的陰性對(duì)照OD值的2.1倍,，即為陽(yáng)性。
雙抗體夾心法(檢測(cè)未知抗原)：
1,、用緩沖液將抗體稀釋至1-10ug/ml,。在反應(yīng)孔中加0.1ml，4℃ 過(guò)夜,。次日,，棄去孔內(nèi)溶液,，用洗滌緩沖液洗3次,。
2、加樣：加一定稀釋的待檢樣品0.05ml于上述已包被之反應(yīng)孔中,，置37℃ 孵育1小時(shí),。然后洗滌(同時(shí)做空白孔，陰性對(duì)照孔及陽(yáng)性對(duì)照孔),。
3,、加酶標(biāo)抗體：于各反應(yīng)孔中，加入新鮮稀釋的酶標(biāo)抗體(經(jīng)滴定后的稀釋度)0.05ml,。37℃ 孵育0.5～1小時(shí),，洗滌。
4,、加底物液顯色：于各反應(yīng)孔中加入臨時(shí)配制的TMB底物溶液0.1ml,，37℃ 10～30分鐘。
5,、終止反應(yīng)：于各反應(yīng)孔中加入2M硫酸0.05ml
6,、結(jié)果判定：可于白色背景上，直接用肉眼觀察結(jié)果：反應(yīng)孔內(nèi)顏色越深,，陽(yáng)性程度越強(qiáng),，陰性反應(yīng)為無(wú)色或極淺，依據(jù)所呈顏色的深淺,，以“+”,、“-”號(hào)表示。也可測(cè)OD值：在ELISA檢測(cè)儀上,，于450nm(若以ABTS顯色,，則410nm)處,，以空白對(duì)照孔調(diào)零后測(cè)各孔OD值，若大于規(guī)定的陰性對(duì)照OD值的2.1倍,，即為陽(yáng)性,。