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質(zhì)粒小量提取試劑盒介紹
閱讀:331 發(fā)布時(shí)間:2020-1-3質(zhì)粒小量提取試劑盒注意事項(xiàng):
1,、溶液Ⅰ在使用前先加入RNaseA(將試劑盒中提供的RNaseA 全部加入),,混勻,,置于2-8℃保存,。
2,、第yi次使用前應(yīng)按照試劑瓶標(biāo)簽的說(shuō)明在漂洗液中加入無(wú)水乙 醇配制成工作液(向15ml的漂洗液中加入60ml的無(wú)水乙醇 ),。
3,、使用前請(qǐng)先檢查溶液Ⅱ和溶液Ⅲ是否出現(xiàn)混濁,如有混濁現(xiàn) 象,,可在37℃水浴中加熱幾分鐘,,待溶液恢復(fù)澄清后再使用。
4,、溶液Ⅱ,、溶液Ⅲ和漂洗液使用后應(yīng)立即蓋緊蓋子,如非指明,,所 有離心步驟均為使用臺(tái)式離心機(jī) 室溫下進(jìn)行離心,。
5、如果是提取革蘭氏陽(yáng)性菌質(zhì)粒,,必須在裂解細(xì)胞前破細(xì)胞 壁,,方法如下:收集適量菌體,加入250ul溶液Ⅰ,,充分懸浮 菌體,,加入溶菌酶至終濃度為10-20mg/ml,37℃處理30min 左右,。加入溶菌酶的濃度和處理時(shí)間可根據(jù)不同的菌株和具體 試驗(yàn)條件進(jìn)行調(diào)整,。
6、洗脫緩沖液的體積好不少于50ul,,體積過(guò)小會(huì)影響回收效 率,;洗脫液的pH值對(duì)洗脫效率也有影響,若需要用水做洗脫液 應(yīng)保證其pH值在8.0左右(可用NaOH將水的pH值調(diào)至此范 圍),,pH值低于7.0會(huì)降低洗脫效率,。
本試劑盒采用堿裂解法裂解細(xì)胞,通過(guò)吸附柱在高鹽狀態(tài)下特異性地結(jié)合溶液中的DNA的特性提取質(zhì)粒DNA,。吸附柱中采用的硅基質(zhì)材料能高效,、專一地吸附DNA,可大限度去除雜質(zhì)蛋白質(zhì)及細(xì)胞中其他有機(jī)化合物,。從1-5ml大腸桿菌LB培養(yǎng)液中,,可快速提取5-15μg純凈地高拷貝質(zhì)粒DNA,,提取率達(dá)85-90%,。使用本試劑盒提取的質(zhì)粒DNA可適用于各種常規(guī)的分子生物學(xué)試驗(yàn),包括酶切,、PCR,、測(cè)序、連接和轉(zhuǎn)化等試驗(yàn),。本試劑盒無(wú)需使用酚,、氯f(wàn)ang等有毒試劑,,操作安全,。