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                               大鼠肺動(dòng)脈成纖維細(xì)胞操作說(shuō)明

 

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細(xì)胞處理：

 

1）復(fù)蘇細(xì)胞：將含有1mL細(xì)胞懸液的凍存管迅速放入37℃水浴中（水面要低于凍存管蓋部）搖晃解凍,，移入事先準(zhǔn)備好的含有4mL培養(yǎng)基的15ml離心管中混合均勻,。在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液,，加入1mL培養(yǎng)基后吹勻,。然后將所有細(xì)胞懸液移入含有5ml培養(yǎng)基的培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過(guò)夜。第二天換液并檢查細(xì)胞密度,。

 

2）細(xì)胞傳代：如果細(xì)胞密度達(dá)80%-90%,，即可進(jìn)行傳代培養(yǎng)。

 

對(duì)于懸浮細(xì)胞,，傳代可參考以下方法：

 

方法一：收集細(xì)胞,，1000RPM，常溫條件下離心5分鐘,，棄去上清液,，補(bǔ)加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻，將細(xì)胞懸液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中,。

 

培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準(zhǔn)備：

 

1）準(zhǔn)備RPMI-1640培養(yǎng)基(RPMI-1640：GIBCO,，貨號(hào)21875-091)，90%,；優(yōu)質(zhì)胎牛血清,，10%。

 

2）培養(yǎng)條件： 氣相：空氣,，95%,；二氧化碳，5%,。 溫度：37℃,，培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。

 

3）凍存液：90%血清,，10%DMSO,，現(xiàn)用現(xiàn)配，液氮儲(chǔ)存。