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技術(shù)文章

兔核因子κB亞基p65親和肽(NF-κB p65)試劑盒操作步驟

閱讀:154          發(fā)布時(shí)間:2019-10-18

                       兔核因子κB亞基p65親和肽(NF-κB p65)試劑盒操作步驟

秋蟬的衰弱的殘聲,,更是北國(guó)的特產(chǎn);因?yàn)楸逼教幪幦L(zhǎng)著樹,,屋子又低,所以無(wú)論在什么地方,,都聽得見它們的啼唱,。在南方是非要上郊外或山上去才聽得到的。這秋蟬的嘶叫,,在北平可和蟋蟀耗子一樣,,簡(jiǎn)直象是家家戶戶都養(yǎng)在家里的家蟲,。接下來(lái)介紹兔核因子κB亞基p65親和肽(NF-κB p65)試劑盒操作步驟

操作步驟:

1.標(biāo)準(zhǔn)品的稀釋:本試劑盒提供原倍標(biāo)準(zhǔn)品一支,用戶可按照下列圖表在小試管中進(jìn)行稀釋,。

2.加樣:分別設(shè)空白孔(空白對(duì)照孔不加樣品及酶標(biāo)試劑,,其余各步操作相同)、標(biāo)準(zhǔn)孔,、待測(cè)樣品孔,。在酶標(biāo)包被板上標(biāo)準(zhǔn)品準(zhǔn)確加樣50μl,待測(cè)樣品孔中先加樣品稀釋液40μl,,然后再加待測(cè)樣品10μl(樣品終稀釋度為5倍),。加樣將樣品加于酶標(biāo)板孔底部,盡量不觸及孔壁,,輕輕晃動(dòng)混勻。

3.溫育:用封板膜封板后置37℃溫育30分鐘,。

4.配液:將30倍濃縮洗滌液用蒸餾水30倍稀釋后備用,。

5.洗滌:小心揭掉封板膜,棄去液體,,甩干,,每孔加滿洗滌液,靜置30秒后棄去,,如此重復(fù)5次,,拍干。

6.加酶:每孔加入酶標(biāo)試劑50μl,,空白孔除外,。

7.溫育:操作同3。

8.洗滌:操作同5,。

9.顯色:每孔先加入顯色劑A50μl,,再加入顯色劑B50μl,輕輕震蕩混勻,,37℃避光顯色15分鐘,。

10. 終止:每孔加終止液50μl,終止反應(yīng)(此時(shí)藍(lán)色立轉(zhuǎn)黃色),。

11. 測(cè)定:以空白空調(diào)零,,450nm波長(zhǎng)依序測(cè)量各孔的吸光度(OD值)。 測(cè)定應(yīng)在加終止液后15分鐘以內(nèi)進(jìn)行,。

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