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ELISA試劑盒操作常見問題及流程
閱讀:255 發(fā)布時間:2019-7-4ELISA試劑盒操作常見問題及流程
上海撫生ELISA 試劑 為你揭幕大家會出現(xiàn)的問題及流程,。
1.一次ELISA實驗需要多長時間,?
雙抗體夾心ELISA法一次實驗需要3.5-4小時,,競爭ELISA法一次實驗需要2-2.5小時,。
2.血清樣本如何處理,?
全血標本于室溫放置2小時或4℃過夜后于1000×g離心20分鐘,。仔細收集上清,。保存過程中如有沉淀形成,,應再次離心。
3. 血漿樣本如何處理,?
建議選擇EDTA或者檸檬酸鈉作為抗凝劑,,混合10-20分鐘后,,于1000×g離心15分鐘,仔細收集上清,。保存過程中如有沉淀形成,,應再次離心,。
4.細胞上清液樣本如何處理?
檢測分泌性的成份時,,用無菌管收集。離心20分鐘左右(1000×g)。仔細收集上清,。5.細胞裂解液樣本如何處理,?
檢測細胞內(nèi)的成份時,,用PBS(PH7.2-7.4)稀釋細胞懸液,,細胞濃度達到100萬/ml左右,。通過反復凍融或者超聲破碎,,以使細胞破壞并放出細胞內(nèi)成份,。離心10分鐘左右(5000×g)。仔細收集上清,。保存過程中如有沉淀形成,,應再次離心,。
6.組織樣本如何處理,?
用預冷的PSB (0.01M,pH=7.4)沖洗組織,,以去除殘留血液(勻漿中裂解的紅細胞會影響測量結果),,稱重后將組織剪碎,。將剪碎的組織與對應體積的PBS(一般按1:9的重量體積比,,比如1g的組織樣本對應9mL的PBS,具體體積可根據(jù)實驗需要適當調(diào)整,,并做好記錄,。推薦在PBS中加入蛋白酶抑制劑)加入玻璃勻漿器中,于冰上充分研磨,。為了進一步裂解組織細胞,可以對勻漿液進行超聲破碎,,或反復凍融,。*后將勻漿液于5000×g 離心5~10分鐘,取上清檢測,。