化工儀器網
技術文章
人elisa試劑盒樣本操作及原理
閱讀：579 發(fā)布時間：2019-5-10人elisa試劑盒樣本操作及原理
人elisa試劑盒組織樣本的處理：
用預冷的PBS (0.01M,pH=7.4)沖洗組織,，以去除殘留血液（勻漿中裂解的紅細胞會影響測量結果）,，稱重后將組織剪碎。將剪碎的組織與對應體積的PBS（一般按1:9的重量體積比,，比如1g的組織樣本對應9mL的PBS,，具體體積可根據實驗需要適當調整，并做好記錄,。推薦在PBS中加入蛋白酶抑制劑）加入玻璃勻漿器中,，于冰上充分研磨。為了進一步裂解組織細胞,，可以對勻漿液進行超聲破碎,，或反復凍融。zui后將勻漿液于5000×g離心5~10分鐘,，取上清檢測,。
關于人elisa試劑盒的固相載體原理：
一、良好的ELISA板應該是吸附機能好,，空缺值低,。
二、為比較不同固相在某一ELISA測定中的優(yōu)劣,，可應用如下的試驗：用其他免疫學測定方法選出一個典型的陽性標本和陰性標本,，將它們進行一系列稀釋后，在不同的固相載體上按預定的ELISA操縱步驟進行測定,，然后比較結果,。可作ELISA中載體的材料良多,，zui常用的是聚苯乙烯,。在ELISA試劑盒中用作固相載體的小珠一般為直徑0.6cm的圓珠，表面經磨砂處理后吸附面積大大增加,。
三,、與聚苯乙烯類似的塑料是聚氯乙烯。人ELISA試劑盒所有單個讀數與全部讀數的均數之差,，應小于10%,。其長處是表面積極大，反應在懸液中進行,，其速率與液相反應近似,。
在哪一種載體上陽性結果與陰性結果差別zui大,，這種載體就是這一ELISA測定項目的zui合適的固相載體。小珠的另一特點是更易于使洗滌*,，使用特殊的洗滌器,，使小珠在洗滌過程中動彈淋洗，其洗滌效果遠較板孔的浸泡式為好,。ELISA試劑盒常用的檢查方法為：以一定濃度的人IgG（一般為10ng/ml）包被ELISA板各孔,，洗滌后每孔內加入適當稀釋度的酶標抗人IgG抗體，保溫后洗滌,，加底物顯色,，終止酶反應后，分別測每孔溶液的吸光度,。以含鐵的磁性微粒作為ELISA固相載體,，反應后用磁鐵的吸引進行分離，洗滌利便,，試劑盒一般均配以特殊儀器,。
四、為便于作少量標本的檢測,，有制成8聯孔條或12聯孔條的,，放入座架后，大小與尺度ELISA板相同,。聚苯乙烯ELISA板因為原料的不同和制作工藝的差別,，各種產品的質量差異很大，因此,，每一批號的ELISA板在使用前須事先檢查其機能,。