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                                      關(guān)于ELISA檢測試劑盒免疫測定,？
 

     ELISA檢測試劑盒中一般有3次加樣步聚,，即加標本，加酶結(jié)合物,，加底物,。加樣時應將所加物加在ELISA試劑盒板孔的底部，避免加在孔壁上部,，并注意不可濺出,，不可產(chǎn)生氣泡,。
       加標本一般用微量加樣器，按規(guī)定的量加入板孔中,。每次加標本應更換吸嘴,，以免發(fā)生交叉污染，也可用一次性的定量塑料管加樣,。有此測定（如間接法 ELISA）需用稀釋的血清,，可在試管中按規(guī)定的稀釋度稀釋后再加樣。也可在板孔中加入稀釋液,，再在其中加入血清標本,，然后在微型震蕩器上震蕩1分鐘以保 證混和。加酶結(jié)合物應用液和底物應用液時可用定量多道加液器,，使加液過程迅速完成,。在ELISA檢測試劑盒中一般有兩次抗原抗體反應，即加標本和加酶結(jié)合物后,?？乖贵w反應的完成需要有一定的溫度和時間，這一保溫過程稱為溫育（incubation）,，有人稱之為孵育,，在ELISA中似不恰當。
       ELISA屬固相,，抗原,、抗體的結(jié)合只在固相表面上發(fā)生。以抗體包被的夾心法為例,，加入板孔中的標本,，其中的抗原并不是都有均等的和固相抗結(jié)合的機會，只有貼近孔壁的一層溶液中的抗原直接與抗體接觸,。這是一個逐步平衡的過程,，因此需經(jīng)擴散
       才能達到反應的終點。在其后加入的酶標記抗體與固相抗原的結(jié)合也同樣如此,。這就是為什么ELISA反應總是需要一定時間的溫育,。
       溫育常采用的溫度有43℃、37℃,、室溫和4℃（冰箱溫度）等,。37℃是實驗室中常用的保溫溫度，也是大多數(shù)抗原抗體結(jié)合的合適溫度,。在建立ELISA方法作反應動力學研究時,，實驗表明，兩次抗原抗體反應一般在37℃經(jīng)1-2小時,，ELISA檢測試劑盒產(chǎn)物的生成可達,。為加速反應,，可提高反應的溫度，有些試驗在43℃進行,，但不宜采用更高的溫度,。抗原抗體反應4℃更為*,，在放射免疫測定中多使反應在冰箱中,，以形成多的沉淀。但因所需時間太長,，在ELISA中一般不予采用。