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                                      關(guān)于ELISA檢測試劑盒免疫測定,？
 

     ELISA檢測試劑盒中一般有3次加樣步聚,，即加標(biāo)本，加酶結(jié)合物,，加底物,。加樣時(shí)應(yīng)將所加物加在ELISA試劑盒板孔的底部，避免加在孔壁上部,，并注意不可濺出,，不可產(chǎn)生氣泡。
       加標(biāo)本一般用微量加樣器,，按規(guī)定的量加入板孔中,。每次加標(biāo)本應(yīng)更換吸嘴，以免發(fā)生交叉污染,，也可用一次性的定量塑料管加樣,。有此測定（如間接法 ELISA）需用稀釋的血清，可在試管中按規(guī)定的稀釋度稀釋后再加樣,。也可在板孔中加入稀釋液,，再在其中加入血清標(biāo)本，然后在微型震蕩器上震蕩1分鐘以保 證混和,。加酶結(jié)合物應(yīng)用液和底物應(yīng)用液時(shí)可用定量多道加液器,，使加液過程迅速完成。在ELISA檢測試劑盒中一般有兩次抗原抗體反應(yīng),，即加標(biāo)本和加酶結(jié)合物后,。抗原抗體反應(yīng)的完成需要有一定的溫度和時(shí)間,，這一保溫過程稱為溫育（incubation）,，有人稱之為孵育，在ELISA中似不恰當(dāng),。
       ELISA屬固相,，抗原、抗體的結(jié)合只在固相表面上發(fā)生,。以抗體包被的夾心法為例,，加入板孔中的標(biāo)本,，其中的抗原并不是都有均等的和固相抗結(jié)合的機(jī)會，只有貼近孔壁的一層溶液中的抗原直接與抗體接觸,。這是一個(gè)逐步平衡的過程,，因此需經(jīng)擴(kuò)散
       才能達(dá)到反應(yīng)的終點(diǎn)。在其后加入的酶標(biāo)記抗體與固相抗原的結(jié)合也同樣如此,。這就是為什么ELISA反應(yīng)總是需要一定時(shí)間的溫育,。
       溫育常采用的溫度有43℃、37℃,、室溫和4℃（冰箱溫度）等,。37℃是實(shí)驗(yàn)室中常用的保溫溫度，也是大多數(shù)抗原抗體結(jié)合的合適溫度,。在建立ELISA方法作反應(yīng)動力學(xué)研究時(shí),，實(shí)驗(yàn)表明，兩次抗原抗體反應(yīng)一般在37℃經(jīng)1-2小時(shí),，ELISA檢測試劑盒產(chǎn)物的生成可達(dá),。為加速反應(yīng)，可提高反應(yīng)的溫度,，有些試驗(yàn)在43℃進(jìn)行,，但不宜采用更高的溫度?？乖贵w反應(yīng)4℃更為*,，在放射免疫測定中多使反應(yīng)在冰箱中，以形成多的沉淀,。但因所需時(shí)間太長,，在ELISA中一般不予采用。