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技術(shù)文章

人結(jié)蛋白(Des)ELISA試劑盒 實(shí)驗(yàn)步驟

閱讀:256          發(fā)布時(shí)間:2018-12-18

人結(jié)蛋白(Des)ELISA試劑盒   實(shí)驗(yàn)步驟:
1. 分別設(shè)空白孔(空白對(duì)照孔不加樣品及酶標(biāo)試劑,其余各步操作相同),、標(biāo)準(zhǔn)品孔,、待測(cè)樣品孔。在酶標(biāo)包被板上標(biāo)準(zhǔn)品孔中加入標(biāo)準(zhǔn)品50μl,;在酶標(biāo)包被板上待測(cè)樣品孔中先加樣品稀釋液40μl,,然后再加待測(cè)樣品10μl(樣品zui終稀釋度為5倍)。人結(jié)蛋白(Des)每孔加入酶標(biāo)試劑50μl,,空白孔除外,。輕輕晃動(dòng)混勻,37℃溫育60分鐘。
2. 棄去液體,,甩干,,每孔加滿稀釋后洗滌液,振蕩30秒,,甩去洗滌液,,用吸水紙拍干。如此重復(fù)5次,,拍干,。
3.人結(jié)蛋白(Des)每孔先加入顯色劑A50μl,再加入顯色劑B50μl,,輕輕震蕩混勻,,37℃避光顯色15分鐘。
4.取出酶標(biāo)板,,每孔加終止液50μl,,終止反應(yīng)(此時(shí)藍(lán)色立轉(zhuǎn)黃色)。
5.人結(jié)蛋白(Des)測(cè)定:以空白孔調(diào)零,,在450nm波長(zhǎng)下測(cè)量各孔的吸光度值(OD值),。 測(cè)定應(yīng)在加終止液后15分鐘以內(nèi)進(jìn)行。
6.根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)品的濃度及對(duì)應(yīng)的OD值計(jì)算出標(biāo)準(zhǔn)曲線的直線回歸方程,,人結(jié)蛋白(Des)再根據(jù)樣品的OD值在回歸方程上計(jì)算出對(duì)應(yīng)的樣品濃度,。也可以使用各種應(yīng)用軟件來計(jì)算。應(yīng)記住由于樣品稀釋了的,,其實(shí)際濃度應(yīng)該乘以總稀釋倍數(shù),。

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