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大鼠ELISA試劑盒深入解析免疫組化實驗的經(jīng)驗總結(jié)
閱讀：503 發(fā)布時間：2018-8-22大鼠ELISA試劑盒深入解析免疫組化實驗的經(jīng)驗總結(jié)
1,、免疫組化實驗所用的組織和細胞標本有哪些,？
實驗所用主要為組織標本和細胞標本兩大類，前者包括石蠟切片（病理大片和組織芯片）和冰凍切片,，后者包括組織印片,、細胞爬片和細胞涂片。其中石蠟切片是制作組織標本*常用,、*基本的方法,，對于組織形態(tài)保存好，且能作連續(xù)切片,，有利于各種染色對照觀察,；還能長期存檔,，供回顧性研究；石蠟切片制作過程對組織內(nèi)抗原暴露有一定的影響,，但可進行抗原修復(fù),，是免疫組化中的組織標本制作方法。
2,、背景：
①考慮一抗?jié)舛雀撸?br />②然后調(diào)整DAB孵育時間,；
③也要考慮血清封閉時間是否過短；
④適當增加抗體孵育后的浸洗次數(shù)和延長浸洗時間等,。
3,、免疫組化常用的染色方法有哪些？
根據(jù)標記物的不同分為免疫熒光法,，免疫酶標法,，親和組織化學(xué)法，后者是以一種物質(zhì)對某種組織成分具有高度親合力為基礎(chǔ)的檢測方法,。這種方法敏感性更高,，有利于微量抗原(抗體)在細胞或亞細胞水平的定位，其中生物素——抗生物素染色法*常用,。
4,、石蠟切片為什么要做抗原修復(fù)？有哪些方法,？
石蠟切片標本均用甲醛固定,，使得細胞內(nèi)抗原形成醛鍵、羧甲鍵而被封閉了部分抗原決定簇,，同時蛋白之間發(fā)生交聯(lián)而使抗原決定簇隱蔽,。所以要求在進行IHC染色時，需要先進行抗原修復(fù)或暴露,，即將固定時分子之間所形成的交聯(lián)破壞,，而恢復(fù)抗原的原有空間形態(tài)。常用的抗原修復(fù)方法有微波修復(fù)法,，高壓加熱法,，酶消化法，水煮加熱法等,，常用的修復(fù)液是pH6.0的0.01 mol/L的檸檬酸鹽緩沖液,。
5、石蠟切片在染色過程中出現(xiàn)脫片現(xiàn)象：
①烤片時間不夠,，或溫度不夠,，可以延長烤片時間和提高烤片溫度；
②用含有多聚賴氨酸的玻片,，可以購買到或這自己做,；
③有些組織本身就容易掉片,，如骨組織等，操作時沖PBS不要直接沖到組織上,，沖到組織上方,，讓它流下沖洗組織；
④用高溫修復(fù)時,，溫度驟冷也可能引起,。
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