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人ELISA試劑盒 實驗的詳細(xì)解說

閱讀:432          發(fā)布時間:2018-7-20

人ELISA試劑盒 實驗的詳細(xì)解說
1.加樣:標(biāo)準(zhǔn)品設(shè)定5個濃度點10個孔,每個濃度設(shè)定平行孔,,加入50微升不同濃度的標(biāo)準(zhǔn)品,,空白孔設(shè)定1個孔加入50微升蒸餾水(空白對照孔不加樣品及酶標(biāo)試劑,其余各步操作相同),、待測樣品孔,,在酶標(biāo)包被板上待測樣品孔中先加樣品稀釋液40μl,,然后再加待測樣品10μl(樣品終稀釋度為5倍)。加樣將樣品加于酶標(biāo)板孔底部,,盡量不觸及孔壁,,輕輕晃動混勻。
2.溫育:用封板膜封板后置37℃溫育30分鐘,。
3.配液:將30(48T的20倍)倍濃縮洗滌液用蒸餾水30(48T的20倍)倍稀釋后備用,。
4.洗滌:小心揭掉封板膜,棄去液體,,甩干,,每孔加滿洗滌液,靜置30秒后棄去,,如此重復(fù)5次,,拍干。
5.加酶:每孔加入酶標(biāo)試劑50μl,,空白孔除外,。
6.溫育:操作同2。
7.洗滌:操作同4,。
8.顯色:每孔先加入顯色劑A50μl,,再加入顯色劑B50μl,輕輕震蕩混勻,,37℃避光顯色15分鐘. 
9.終止:每孔加終止液50μl,,終止反應(yīng)(此時藍(lán)色立轉(zhuǎn)黃色)。
10.測定:以空白空調(diào)零,,450nm波長依序測量各孔的吸光度(OD值),。 測定應(yīng)在加終止液后15分鐘以內(nèi)進行。
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