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大鼠ELISA試劑盒實驗中更穩(wěn)定的方法
因為蛋白質(zhì)與聚苯乙烯固相載體是通過物理吸附結(jié)合的,，靠的是蛋白質(zhì)分子結(jié)構(gòu)上的疏水基團(tuán)與固相載體表面的疏水基團(tuán)間的作用，這種物理吸附長短特異性的,，受蛋白質(zhì)的分子量,、等電點、濃度等的影響,，大分子蛋白質(zhì)較小分子蛋白質(zhì)通常含有更多的疏水基團(tuán),，故更易吸附到固相載體表面。小分子必需依賴和大的蛋白載體偶聯(lián)后才能固定在固相載體上,。還有有的包被原可能不是蛋白,，對于生物素和脂類物質(zhì)或小分子物質(zhì)我們要事先對其改造再加以包被，親和素生物素:先親和素先包被載體,，加入生物素化的DNA,，這種包被方法平均、牢固,，已擴(kuò)大應(yīng)用于各種抗原物質(zhì)的定量測定,。常用的包被液除了剛才提到的pH9.6碳酸鹽緩沖液，還有pH7.2的磷酸鹽緩沖液和pH7-8的Tris-HCL緩沖液等等,。
檢測系統(tǒng)可謂是免疫學(xué)反應(yīng)應(yīng)用到科研出產(chǎn)中zui為敏捷的技術(shù)手段,。自己也為此苦惱過很長一段時間，跟著自己技術(shù)水平得進(jìn)步,，或多或少地也把握了ELISA體系的脾氣,，也是熟能生巧吧，現(xiàn)在做方陣,，做ELISA已是輕車熟路了,，ELISA試劑盒以前檢測一種抗體用整整一下戰(zhàn)書還算得暈暈的，現(xiàn)在給我十個八個的從包被到顯色,，一個工作日基本搞定,?？墒窃谛吕鲜植倏v過程中老是會泛起或大或小的題目，本人在剛開始做ELISA時就面對良多災(zāi)題,，固然有師兄師姐鋪路,，但仍是經(jīng)常做得烏煙瘴氣，好比說花板,，假陽性,，全顯色，全部顯色,，顯色比空缺還低,。
常用封鎖劑有：0.05%-0.5%的BSA；10%的小牛血清或1%明膠,；脫脂奶粉,，比較價廉,，可以高濃度使用（5%－10％）,；還有一些稀有用到的各種動物血清（主要為了排除相似蛋白干擾）和酪蛋白等等。詳細(xì)的試驗還要有堅固的理論外也要實踐,，看一下*可不可以應(yīng)用到自己試驗當(dāng)中去,。但*選用什么，要依據(jù)試驗詳細(xì)來實踐,。
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