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人ELISA試劑盒使用和處理中的常見問題
閱讀：336 發(fā)布時(shí)間：2018-4-25人ELISA試劑盒使用和處理中的常見問題
1.保存血清的方法
建議血清應(yīng)保存在-5℃至-2O℃,。若存放于4℃時(shí)，請(qǐng)勿超過一個(gè)月,。一次無法用完一瓶,，建議您無菌分裝血清至恰當(dāng)?shù)臏缇萜鲀?nèi)，再放回冷凍,。
2.如何解凍血清才不會(huì)使產(chǎn)品品質(zhì)受損
將血清從冷凍箱取出后,，先置于2～8℃冰箱使之融解，然后在室溫下使之全融。但必須注意的是,，融解過程中必須規(guī)則地?fù)u晃均勻,。
3.血清解凍后發(fā)現(xiàn)有絮狀沉淀物出現(xiàn)，該如何處理
血清中沉淀物的出現(xiàn)有許多種原因,，但zui普遍的原因是由于血清中脂蛋白的變性所造成,，血纖維蛋白（形成凝血的蛋白之一）在血清解凍后，也會(huì)存在于血清中,，亦是造成沉淀物的主要原因之一,。但這些絮狀沉淀物，并不影響血清本身的品質(zhì),。
欲去除這些絮狀沉淀物,，可以將血清分裝至無菌離心管內(nèi)離心，上清液即可接著加入培養(yǎng)基內(nèi)一起過濾,。不建議以過濾的方法去除這些絮狀沉淀物,，因?yàn)樗赡軙?huì)阻塞您的過濾膜。
4.為什么要熱滅活血清
加熱可以滅活補(bǔ)體系統(tǒng),。啟動(dòng)的補(bǔ)體參與溶解細(xì)胞事件,，刺激平滑肌收縮，細(xì)胞和血小板釋放組胺,，啟動(dòng)淋巴細(xì)胞和巨噬細(xì)胞,。在免疫學(xué)研究，培養(yǎng)ES細(xì)胞,，昆蟲細(xì)胞和平滑肌細(xì)胞時(shí),，推薦使用熱滅活血清。
5.有必要做熱滅活嗎
實(shí)驗(yàn)顯示,，經(jīng)過正確處理的熱滅活血清,，對(duì)大多數(shù)的細(xì)胞而言是不需要的。經(jīng)此處理過的血清對(duì)細(xì)胞的生長只有微小的促進(jìn),，或*沒有任何作用,，甚至通常因?yàn)楦邷靥幚碛绊懥搜宓钠焚|(zhì)，而造成細(xì)胞生長速率的降低,。而經(jīng)過熱處理的血清,，沉淀物的形成會(huì)顯著的增多，這些沉淀物在倒置顯微鏡下觀察,，如同“小黑點(diǎn)”,，常常會(huì)讓研究者誤以為是血清遭受污染，而把血清放在37℃環(huán)境中,，又會(huì)使此沉淀物更增多,，使研究者誤認(rèn)為是微生物的分裂擴(kuò)增,。因此，除非必須,，盡可能不需要做熱處理這一步。
6.為什么儲(chǔ)存在冰箱中的胎牛血清會(huì)出現(xiàn)沉淀
儲(chǔ)存在2－8℃時(shí),，血清中的各種蛋白和脂蛋白（如冷凝集素,、纖維蛋白原、玻粘連蛋白等）可能聚集而形成沉淀或可見的混濁,。這應(yīng)該不會(huì)影響血清的品質(zhì),。建議在－20℃儲(chǔ)存胎牛血清，避免反復(fù)凍融,。
7.如何避免沉淀物的產(chǎn)生
解凍血清時(shí),，請(qǐng)按照所建議的逐步解凍法（-20℃至4℃至室溫），若血清解凍時(shí)改變的溫度太大（如-20℃至37℃）,，實(shí)驗(yàn)顯示非常容易產(chǎn)生沉淀物,。 解凍血清時(shí)，請(qǐng)隨時(shí)將之搖晃均勻,，使溫度及成分均一,，減少沉淀的發(fā)生。 請(qǐng)勿將血清置于37℃太久,。若在37℃放置太久,，血清會(huì)變得混濁，同時(shí)血清中許多較不穩(wěn)定的成分也會(huì)因此受到損害,，而影響血清的品質(zhì),。 血清的熱滅活非常容易造成沉淀物的增多，若非必要,，可以無須做此步驟,。若必須做血清的熱滅活，請(qǐng)遵守56℃,，30分鐘的原則,，并且隨時(shí)搖晃均勻。溫度過高,，時(shí)間過久或搖晃不均勻,，都會(huì)造成沉淀物的增多。
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