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大鼠ELISA試劑盒實(shí)驗(yàn)稀釋血清的步驟

閱讀:637          發(fā)布時(shí)間:2018-4-2

大鼠ELISA試劑盒實(shí)驗(yàn)稀釋血清的步驟:
先把蛋白稀釋一定的倍數(shù),,比如說(shuō)10倍,、20倍稀釋?zhuān)ㄟ@樣可以大體確定一個(gè)參數(shù)),,將抗原進(jìn)行一系列稀釋包被微量反應(yīng)板,再用一定稀釋度的陽(yáng)性參考血清和陰性參考血清進(jìn)行孵育后洗滌,,再加酶結(jié)合物進(jìn)行反應(yīng),,經(jīng)孵育洗滌后,加底物溶液顯色,,終止反應(yīng)后分別測(cè)定O.D值,,選擇O.D值≥1.0的那個(gè)抗原稀釋度為*適包被濃度。一般總是要選擇那個(gè)O.D值稍大于1.0,,而不選擇小于1.0的抗原濃度。陰性參考血清O.D值要求<0.1-0.2。也就是要求陽(yáng)性參考血清和陰性參考血清的O.D值有明顯差別,。
使用注意事項(xiàng)
1.試劑盒從冷藏環(huán)境中取出應(yīng)在室溫平衡15-30分鐘后方可使用,,酶標(biāo)包被板開(kāi)封后如未用完,板條應(yīng)裝入密封袋中保存,。
2.濃洗滌液可能會(huì)有結(jié)晶析出,,稀釋時(shí)可在水浴中加溫助溶,洗滌時(shí)不影響結(jié)果,。
3.各步加樣均應(yīng)使用加樣器,,并經(jīng)常校對(duì)其準(zhǔn)確性,以避免試驗(yàn)誤差,。一次加樣時(shí)間控制在5分鐘內(nèi),,如標(biāo)本數(shù)量多,推薦使用排槍加樣,。
4. 請(qǐng)每次測(cè)定的同時(shí)做標(biāo)準(zhǔn)曲線,,做復(fù)孔。如標(biāo)本中待測(cè)物質(zhì)含量過(guò)高(樣本OD值大于標(biāo)準(zhǔn)品孔*孔的OD值),,請(qǐng)先用樣品稀釋液稀釋一定倍數(shù)(n倍)后再測(cè)定,,計(jì)算時(shí)請(qǐng)zui后乘以總稀釋倍數(shù)(×n×5)。
5. 封板膜只限一次性使用,,以避免交叉污染,。
6.底物請(qǐng)避光保存。
7.嚴(yán)格按照說(shuō)明書(shū)的操作進(jìn)行,,試驗(yàn)結(jié)果判定必須以酶標(biāo)儀讀數(shù)為準(zhǔn).
8.所有樣品,,洗滌液和各種廢棄物都應(yīng)按傳染物處理。
9.本試劑不同批號(hào)組分不得混用,。
10. 如與英文說(shuō)明書(shū)有異,,以英文說(shuō)明書(shū)為準(zhǔn)。
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