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小鼠ELISA試劑盒經(jīng)驗(yàn)總結(jié)
閱讀：479 發(fā)布時(shí)間：2018-3-16小鼠ELISA試劑盒經(jīng)驗(yàn)總結(jié):
1,、包被原的性質(zhì)很重要,，蛋白濃度，是否降解,，這關(guān)系到你做出的抗體可不可以被其識(shí)別,，所以保存抗原很重要，我做重組蛋白時(shí),，師兄都嚴(yán)格警告我一定要在冰浴下緩慢融化就是這個(gè)道理,。還有有的包被原可能不是蛋白，對(duì)于生物素和脂類(lèi)物質(zhì)或小分子物質(zhì)我們要事先對(duì)其改造再加以包被,，我把方法簡(jiǎn)要的列出如下:①親和素生物素:先親和素先包被載體,，加入生物素化的DNA，這種包被方法均勻,、牢固,，已擴(kuò)大應(yīng)用于各種抗原物質(zhì)。②脂類(lèi)物質(zhì):可將其在有機(jī)溶劑（例如乙醇）中溶解后加入ELISA試劑盒板孔中,，開(kāi)蓋置冰箱過(guò)夜或冷風(fēng)吹干,，待酒精揮發(fā)后，讓脂質(zhì)自然干固在固相表面,。③小分子必須依靠和大的蛋白載體偶聯(lián)后才能固定在固相載體上,。
2、包被液的選擇,，一般選擇ph9.6的碳酸鹽緩沖液,。但有時(shí)由于試驗(yàn)的需要，包被原的特殊性也可能采用中性的緩沖溶液來(lái)包,。應(yīng)注意以下原理：由于蛋白質(zhì)與聚苯乙烯固相載體是通過(guò)物理吸附結(jié)合的,，靠的是蛋白質(zhì)分子結(jié)構(gòu)上的疏水基團(tuán)與固相載體表面的疏水基團(tuán)間的作用，這種物理吸附是非特異性的,，受蛋白質(zhì)的分子量,、等電點(diǎn)、濃度等的影響,，大分子蛋白質(zhì)較小分子蛋白質(zhì)通常含有更多的疏水基團(tuán),，故更易吸附到固相載體表面。具體的試驗(yàn)還要有堅(jiān)固的理論外也要實(shí)踐,，看一下zui終可不可以應(yīng)用到自己試驗(yàn)當(dāng)中去,。常用的包被液除了剛才提到的pH9.6碳酸鹽緩沖液，還有pH7.2的磷酸鹽緩沖液和pH7-8的Tris-HCL緩沖液等等,。
3,、封閉：繼包被之后用高濃度的無(wú)關(guān)蛋白質(zhì)溶液再包被的過(guò)程。封閉就是讓大量不相關(guān)的蛋白質(zhì)充填這些空隙,，從而排斥ELISA后的步驟中干擾物質(zhì)的再吸附,。常用封閉劑有：0.05%-0.5%的BSA;10%的小牛血清或1%明膠;脫脂奶粉，比較價(jià)廉,，可以高濃度使用（5%-10%）;還有一些稀有用到的各種動(dòng)物血清（主要為了排除相似蛋白干擾）和酪蛋白等等,。但zui終選用什么，要依據(jù)試驗(yàn)具體來(lái)實(shí)踐,。
4,、洗滌板：可以說(shuō)在ELISA試劑盒操作中，洗滌是zui主要的關(guān)鍵技術(shù),。因?yàn)榫郾揭蚁┑人芰蠈?duì)蛋白質(zhì)的吸附是普遍性的,，為達(dá)到分離游離的和結(jié)合的酶標(biāo)記物的目的，清除殘留在板孔中游離的物質(zhì),，以及非特異性地吸附的干擾物質(zhì),，在洗滌時(shí)又應(yīng)把這種非特異性吸附的干擾物質(zhì)洗滌下來(lái)。所以在洗板時(shí)會(huì)有一定誤差,，人為因素很大（當(dāng)然有條件的用洗板機(jī)除外）,，洗的不*或串了孔，對(duì)如此靈敏的ELISA系統(tǒng)可是不小的影響,。
5,、加抗體標(biāo)本（和二抗）:注意該換槍頭時(shí)換槍頭。標(biāo)本稀釋一般可用PBS稀釋,，也可用封閉液去稀釋,。如需加二抗，ELISA試劑盒還要注意二抗的工作濃度,，太高浪費(fèi),，太低則著色淺,。
小鼠ELISA試劑盒間隙連接蛋白43(CX43)ELISA試劑盒 ，英文名： CX43 ELISA Kit
間隙連接蛋白40(CX40)ELISA試劑盒 ,，英文名： CX40 ELISA Kit
間隙連接蛋白37(CX37)ELISA試劑盒 ,，英文名： CX37 ELISA Kit
間隙連接蛋白31(CX31)ELISA試劑盒 ，英文名： CX31 ELISA Kit
間隙連接蛋白26(CX26)ELISA試劑盒 ,，英文名： CX26 ELISA Kit
間生蛋白1(MSGN1)ELISA試劑盒 ,，英文名： MSGN1 ELISA Kit
假尿苷酸合酶7(PUS7)ELISA試劑盒 ，英文名： PUS7 ELISA Kit
假尿苷酸合酶3(PUS3)ELISA試劑盒 ,，英文名： PUS3 ELISA Kit
假尿苷酸合酶10(PUS10)ELISA試劑盒 ,，英文名： PUS10 ELISA Kit
假尿苷酸合酶1(PUS1)ELISA試劑盒 ，英文名： PUS1 ELISA Kit
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鉀氯協(xié)同轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白4(KCC4)ELISA試劑盒 ,，英文名： KCC4 ELISA Kit
鉀氯協(xié)同轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白3(KCC3)ELISA試劑盒 ，英文名： KCC3 ELISA Kit
鉀氯協(xié)同轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白2(KCC2)ELISA試劑盒 ,，英文名： KCC2 ELISA Kit
鉀蛋白(KALRN)ELISA試劑盒 ,，英文名： KALRN ELISA Kit
甲狀腺轉(zhuǎn)錄因子1(TITF1)ELISA試劑盒 ，英文名： TITF1 ELISA Kit
甲狀腺素受體β(THRβ)ELISA試劑盒 ,，英文名： THRβ ELISA Kit
甲狀腺素受體α(THRα)ELISA試劑盒 ,，英文名： THRα ELISA Kit
甲狀腺激素自身抗體(THAA)ELISA試劑盒 ，英文名： THAA ELISA Kit
甲狀腺激素反應(yīng)基因(THRSP)ELISA試劑盒 ,，英文名： THRSP ELISA Kit
甲狀旁腺素受體2(PTHR2)ELISA試劑盒 ,，英文名： PTHR2 ELISA Kit
甲狀旁腺素受體1(PTHR1)ELISA試劑盒 ，英文名： PTHR1 ELISA Kit
甲狀旁腺激素2(PTH2)ELISA試劑盒 ,，英文名： PTH2 ELISA Kit
甲型肝炎病毒細(xì)胞受體2(HAVCR2)ELISA試劑盒 ,，英文名： HAVCR2 ELISA Kit
甲酰肽受體2(FPR2)ELISA試劑盒 ，英文名： FPR2 ELISA Kit
甲巰蛋白(TPN)ELISA試劑盒 ,，英文名： TPN ELISA Kit
甲羥戊酸脫羧酶(MVD)ELISA試劑盒 ,，英文名： MVD ELISA Kit
甲羥戊酸激酶(MVK)ELISA試劑盒 ，英文名： MVK ELISA Kit
甲硫腺苷磷酸化酶(MTAP)ELISA試劑盒 ,，英文名： MTAP ELISA Kit
甲硫氨酰氨肽酶2(METAP2)ELISA試劑盒 ,，英文名： METAP2 ELISA Kit
甲硫氨酰氨肽酶1(METAP1)ELISA試劑盒 ，英文名： METAP1 ELISA Kit小鼠ELISA試劑盒