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ELISA試劑盒凱氏定氮法測(cè)定化合物總氮量的注意之處
閱讀:1150 發(fā)布時(shí)間:2017-2-13人ELISA試劑盒凱氏定氮法的注意十處:
1.樣品放入定氮瓶?jī)?nèi)時(shí),,不要沾附頸上,。萬(wàn)一沾附可用少量水沖下,,以免被檢樣消化不*,結(jié)果偏低,。
2.如硫酸缺少,,過(guò)多的硫酸鉀會(huì)引起氨的損失,這樣會(huì)形成硫酸氫鉀,,而不與氨作用,。因此,當(dāng)硫酸過(guò)多的被消耗或樣品中脂肪含量過(guò)高時(shí),,要增加硫酸的量,。(3) 硝化時(shí)如不容易呈透明溶液,可將定氮瓶放冷后,,慢慢加入30%過(guò)氧化氫(H2O2)2-3ml,,促使氧化,。
3.在整個(gè)消化過(guò)程中,不要用強(qiáng)火,。保持和緩的沸騰,,使火力集中在凱氏瓶底部,以免附在壁上的蛋白質(zhì)在無(wú)硫酸存在的情況下,,使氮有損失,。
4.氨是否*蒸餾出來(lái),可用PH試紙?jiān)囸s出液是否為堿性,。
5.吸收液也可以用0.01當(dāng)量的酸代表硼酸,,過(guò)剩的酸液用0.01N堿液滴定,計(jì)算時(shí),,A為試劑空白消耗堿液數(shù),,B為樣品消耗堿液數(shù),N為堿液濃度,,其余均相同,。
6.向蒸餾瓶中加入濃堿時(shí),往往出現(xiàn)褐色沉淀物,,這是由于分解促進(jìn)堿與加入的硫酸銅反應(yīng),,生成氫氧化銅,經(jīng)加熱后又分解生成氧化銅的沉淀,。有時(shí)銅離子與氨作用生成深l藍(lán)色的結(jié)物[Cu(NH3)4]2+
7.這種測(cè)算方法本質(zhì)是測(cè)出氮的含量,,再作蛋白質(zhì)含量的估算。只有在被測(cè)物的組成是蛋白質(zhì)時(shí)才能用此方法來(lái)估算蛋白質(zhì)含量,。
8.加入硫酸鉀的作用為增加溶液的沸點(diǎn),,硫酸銅為催化劑,硫酸銅在蒸餾時(shí)作堿性反應(yīng)的指示劑,。
9.混合指示劑在堿性溶液中呈綠色,,在中性溶液中呈灰色,在酸性溶液中呈紅色,。如果沒(méi)有溴甲酚綠,,可單獨(dú)使用0.1%甲基紅乙醇溶液,。
10.以硼酸為氨的吸收液,,可省去標(biāo)定堿液的操作,且硼酸的體積要求并不嚴(yán)格,,亦可免去用移液管,,操作比較簡(jiǎn)便。
人ELISA試劑盒凱氏定氮法是測(cè)定化合物或混合物中總氮量的一種方法,。
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