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人ELISA試劑盒凱氏定氮法注意事項

1.樣品應(yīng)是均勻的,。固體樣品應(yīng)預(yù)先研細混勻，液體樣品應(yīng)振搖或攪拌均勻,。

2.如硫酸缺少,，過多的硫酸鉀會引起氨的損失，這樣會形成硫酸氫鉀,，而不與氨作用,。因此,，當(dāng)硫酸過多的被消耗或樣品中脂肪含量過高時，要增加硫酸的量,。

3.加入硫酸鉀的作用為增加溶液的沸點,，硫酸銅為催化劑，硫酸銅在蒸餾時作堿性反應(yīng)的指示劑,。

4.混合指示劑在堿性溶液中呈綠色,，在中性溶液中呈灰色,，在酸性溶液中呈紅色,。如果沒有溴甲酚綠，可單獨使用0.1%甲基紅乙醇溶液,。

5.氨是否*蒸餾出來,，可用PH試紙試餾出液是否為堿性。

6.吸收液也可以用0.01當(dāng)量的酸代表硼酸,，過剩的酸液用0.01N堿液滴定,，計算時，A為試劑空白消耗堿液數(shù),，B為樣品消耗堿液數(shù),，N為堿液濃度，其余均相同,。

7.以硼酸為氨的吸收液,，可省去標定堿液的操作，且硼酸的體積要求并不嚴格,，亦可免去用移液管,，操作比較簡便。

8.向蒸餾瓶中加入濃堿時,，往往出現(xiàn)褐色沉淀物,，這是由于分解促進堿與加入的硫酸銅反應(yīng)，生成氫氧化銅,，經(jīng)加熱后又分解生成氧化銅的沉淀,。有時銅離子與氨作用，生成深l藍色的結(jié)合物[Cu(NH3)4]2+

9.這種測算方法本質(zhì)是測出氮的含量,，再作蛋白質(zhì)含量的估算,。只有在被測物的組成是蛋白質(zhì)時才能用此方法來估算蛋白質(zhì)含量。  

10.樣品放入定氮瓶內(nèi)時,，不要沾附頸上,。萬一沾附可用少量水沖下，以免被檢樣消化不*,，結(jié)果偏低,。

11.硝化時如不容易呈透明溶液，可將定氮瓶放冷后，慢慢加入30%過氧化氫（H2O2）2-3ml,，促使氧化,。

12.在整個消化過程中，不要用強火,。保持和緩的沸騰,，使火力集中在凱氏瓶底部，以免附在壁上的蛋白質(zhì)在無硫酸存在的情況下,，使氮有損失,。

人ELISA試劑盒凱氏定氮法是測定化合物或混合物中總氮量的一種方法。即在有催化劑的條件下,，用濃硫酸消化樣品將有機氮都轉(zhuǎn)變成無機銨鹽,，然后在堿性條件下將銨鹽轉(zhuǎn)化為氨，隨水蒸氣蒸餾出來并為過量的硼酸液吸收,，再以標準鹽酸滴定,，就可計算出樣品中的氮量。由于蛋白質(zhì)含氮量比較恒定,，可由其氮量計算蛋白質(zhì)含量,，故此法是經(jīng)典的蛋白質(zhì)定量方法。
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