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ELISA試劑盒專家的一項重要研究：蓖麻毒蛋白提取率的方法
閱讀：2260 發(fā)布時間：2016-12-23人ELISA試劑盒蓖麻毒蛋白已被廣泛用于"導向藥物"的制備(即免疫毒素),，將蓖麻毒蛋白應(yīng)用于生物農(nóng)藥方向也已受到廣泛關(guān)注與研究,，因此,，蓖麻毒蛋白的提取純化具有重要意義,，研究提高蓖麻毒蛋白提取率的方法，并用于大規(guī)模之中,，是許多專家正在進行的一項重要研究,。
從蓖麻種子或蓖麻餅粕中提取蓖麻毒蛋白粗提液的方法主要有:乙酸溶液提取法;磷酸緩沖溶液提取法;硫酸銨沉淀法和透析法等。隨著基因技術(shù)的發(fā)展,，利用基因克隆方法獲得Ricin亦有成功報道,。
酸緩沖液提取:用磷酸緩沖液浸泡蓖麻餅處理樣品20 h后，用聚乙二醇吸水,，經(jīng)5000r/min離心機離心15min,，取上清液測定蓖麻毒蛋白含量。
硫酸銨沉淀和透析法:在濾液中分別加入固體硫酸銨70%飽和度,，5000r/min離心20min,，所得深沉物先對蒸餾水透析，再對pH 7.7的HCl-Tris緩沖液透析,。透析后的樣品用相對分子質(zhì)量為6000的聚乙二醇覆1-2天,，直至把樣品中的水分吸干得粗蓖麻毒蛋白。收集所得粗蓖麻毒蛋白,，用紫外分光光度計測定蓖麻毒蛋白含量,。利用蓖麻毒素和凝集素對D-半乳糖基結(jié)合的特性，采用瓊脂糖Sepharose 4B吸附,，用半乳糖洗脫,，再用纖維素離子交換柱層析或葡聚糖凝膠過濾可進一步純化得到蓖麻毒素。高寶巖將適量去殼蓖麻籽和石油醚加入到食品粉碎機中進行粉碎脫脂，過濾除去石油醚,，所得脫脂蓖麻粉置于用醋酸調(diào)整pH=3.8的醋酸水溶液中浸取12h,，所得上清液對蒸餾水透析24h，然后對pH=6.5磷酸緩沖溶液透析24h,，透析液經(jīng)25000 r/min超速離心30min,，上清液為蓖麻毒蛋白粗提液。然后將蓖麻毒蛋白進行柱層析分離純化,，毒蛋白粗提液經(jīng)瓊脂糖Sepharose 4B分離得到純品,。鄭成等通過乙酸提取、硫酸銨沉淀,、透析,，制備蓖麻粗蛋白，用紫外可見分光光度計測定蓖麻毒蛋白的含量,，還使用液相色譜進行了分析,，提取率較高，結(jié)果較滿意,。
人ELISA試劑盒隨著基因工程技術(shù)的發(fā)展,，已能利用基因克隆的方法制備Ricin。從蓖麻籽中提取信使核糖核酸(MRNA),，建立CDNA文庫,，通過克隆獲得Ricin。由于基因轉(zhuǎn)導的性,、較高的表達水平和完整的翻譯后加工過程,，此系統(tǒng)適用于制備臨床治療用的Ricin。
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