技術(shù)文章
免疫組化中抗體選擇要求
閱讀:86 發(fā)布時(shí)間:2016-8-221,、一抗選擇要點(diǎn)
ELISA試劑盒(1)選擇單克隆還是多克隆抗體,。由一種克隆產(chǎn)生的特異性抗體叫做單克隆抗體,單克隆抗體能目標(biāo)明確地與單一特異抗原決定簇結(jié)合,,就象地命中目標(biāo)一樣,。另一方面,即使是同一個(gè)抗原決定簇,,在機(jī)體內(nèi)也可以由好幾種克隆產(chǎn)生抗體,,形成好幾種單克隆抗體混雜物,稱為多克隆抗體,。在抗原抗體反應(yīng)中,,一般單克隆抗體特異性強(qiáng),,但親和力相對(duì)小,檢測(cè)抗原靈敏度相對(duì)較低,;而多克隆抗體特異性稍弱,,抗體的親和力強(qiáng),靈敏度高,,但易出現(xiàn)非特異性染色(可以通過封閉等有所避免),。
(2)種屬來源。一般家兔來源的抗體多是多克??;而小鼠來源的抗體多是單克隆,但也有另外,。這條主要要與后面的二抗來源相匹配。
(3)實(shí)驗(yàn)?zāi)康氖菣z測(cè)什么種屬的抗原,,即species reactivity,。這一點(diǎn)很重要,一般說明書上都有注明,,如小鼠Ms,、大鼠Rat、人Hum等等,。
(4)能否做免疫組化,。一般一抗說明書都會(huì)注明做WB、IHC,、ICC,、IF等,建議選擇注明的抗體,,因?yàn)橐话愣际墙?jīng)過文章證明,。ELISA試劑盒
(5)檢測(cè)標(biāo)本類型。用于檢測(cè)石蠟切片還是冰凍切片,,一般能做石蠟切片的抗體,,可能都可以用來檢測(cè)冰凍切片,但能做冰凍切片的抗體,,不一定能檢測(cè)石蠟切片中的抗原,。
(6)。國(guó)外抗體商原裝抗體質(zhì)量一般沒問題,,但有點(diǎn)貴,;而國(guó)內(nèi)分裝用的一抗工作液,價(jià)格便宜,,但有時(shí)結(jié)果的穩(wěn)定性和重復(fù)性稍差,,尤其不同批次重復(fù)性較差。
(7)價(jià)格與質(zhì)量的矛盾。一抗原裝質(zhì)量可能會(huì)好點(diǎn),,因?yàn)樵S多一抗避免反復(fù)凍融,,且在稀釋液中穩(wěn)定性較差(若時(shí)間長(zhǎng)),但價(jià)格較貴,。
2,、二抗選擇要點(diǎn):
(1)種屬來源。主要根據(jù)一抗種屬來源來決定購(gòu)買二抗來源,,如一抗是小鼠來源,,那二抗就買抗小鼠的即可(羊、兔等均可),。
(2)標(biāo)記物的選擇,。有HRP、Biotin,、熒光素等標(biāo)記物,。一般SP三步法二抗選擇Biotin標(biāo)記的二抗,以與后面的SP結(jié)合反應(yīng),;而免疫熒光染色就需要購(gòu)買不同熒光素標(biāo)記的二抗,,如羅丹明、FITC,、Cy3等常用熒光素,。這主要與后面有無三抗和三抗種類有關(guān)。
(3)選擇IgM還是IgG,。一般一抗是IgM,,那么二抗就選擇IgM;反之,,一抗是IgG,,則二抗選擇IgG。
EME1 減數(shù)分裂內(nèi)切酶EME1抗體
FAM62B 延伸突觸蛋白2抗體
ESYT1 延伸突觸蛋白1抗體
protein 4.2 紅細(xì)胞膜蛋白4.2抗體
ELYS 轉(zhuǎn)錄因子ELYS蛋白抗體
Endomucin 內(nèi)皮粘蛋白EMCN抗體
Epac1 環(huán)磷酸腺苷調(diào)節(jié)鳥嘌呤核苷酸交換因子1抗體
phospho-E2F1 (Thr433) 磷酸化轉(zhuǎn)錄因子E2F1抗體