購買國外細(xì)胞株需要考慮的因素有如下幾點:1、細(xì)胞株的生物等級,,由于有些細(xì)胞株及菌株屬于管制品,,所以從國外購貨比較麻煩。2,、在購買國外細(xì)胞株時,,需交待國外加比較多的干冰(一般在13公斤以上,采用比較密封的泡沫盒加套紙箱),。 293E細(xì)胞,,上海乾思生物公司細(xì)胞近3000種,來源于美國ATCC,細(xì)胞都是經(jīng)過嚴(yán)格質(zhì)量控制,,在中國大陸努力搭建正牌細(xì)胞與國內(nèi)廣大科研人員之間的溝通橋梁,。293E細(xì)胞外,還有更多相關(guān)實驗產(chǎn)品,標(biāo)準(zhǔn)品,,細(xì)胞株和實驗技術(shù)服務(wù)等等前期后續(xù)服務(wù),。
一. 293E細(xì)胞* 細(xì)胞凍存 *
目前細(xì)胞凍存多采用甘油或二甲基亞砜作保護(hù)劑,這兩種物質(zhì)能提高細(xì)胞膜對水的通透性,,加上緩慢冷凍可使細(xì)胞內(nèi)的水分滲出細(xì)胞外,,減少細(xì)胞內(nèi)冰晶的形成,從而減少由冰晶形成的細(xì)胞損傷,。
1,、10%的DMSO+90%胎牛血清。甘油一般用于菌種保存很少用于細(xì)胞凍存,。
2,、取對數(shù)生長期的細(xì)胞,用胰蛋白酶把單層生長的細(xì)胞消化下來,,懸浮生長的細(xì)胞則直接將細(xì)胞移至15ml離心管中,。
3,、離心1000 rpm,5 min,。
4,、去除胰蛋白酶及舊的培養(yǎng)液,,加入適量配制好的凍存培養(yǎng)液,用吸管輕輕吹打使細(xì)胞均勻,,計數(shù),,調(diào)節(jié)凍存液中細(xì)胞的zui終密度為5x10^6/ml~1x10^7/ml,。
5,、 在凍存管上標(biāo)明細(xì)胞的名稱,,凍存時間及操作者。
6,、凍存:標(biāo)準(zhǔn)的凍存程序為降溫速率-1~-2℃/min,;當(dāng)溫度達(dá)到-25℃以下時,可增至-5℃~-10℃/min,;到-100℃時,,則可迅速浸入液氮中。也可將裝有細(xì)胞的凍存管放入-20℃冰箱2h,,然后放入-70℃冰箱中過夜,取出凍存管,,移入液氮容器內(nèi),。
二.293E細(xì)胞 * 細(xì)胞復(fù)蘇 *
1、從液氮容器中取出凍存管,,直接浸入37℃溫水中,,并不時搖動令其盡快融化。
2、從37℃水浴中取出凍存管,,打開蓋子,,用吸管吸出細(xì)胞懸液,加到離心管并滴加10倍以上培養(yǎng)液,,混勻,。
3、離心,,1000 rpm,,5 min。
4,、棄去上層清液,,加入含10%胎牛血清培養(yǎng)液重懸細(xì)胞,計數(shù),,調(diào)整細(xì)胞密度,,接種培養(yǎng)瓶,37℃培養(yǎng)箱靜置培養(yǎng),。
5,、次日更換一次培養(yǎng)液,繼續(xù)培養(yǎng),。
購買上海乾思物細(xì)胞注意事項(乾思生物)發(fā)布
一,、客戶收到細(xì)胞先不開蓋,放在培養(yǎng)箱靜置若干小時后(看細(xì)胞密度而定)在倒置顯微鏡下觀察細(xì)胞生長情況,,并對細(xì)胞進(jìn)行不同倍數(shù)拍照(建議受收細(xì)胞時的培養(yǎng)基拍一張照片,,觀察培養(yǎng)基的顏色和是否有漏液情況,顯微鏡下拍細(xì)胞100X,,200X各一張),,排除細(xì)胞本身污染的情況;
收到細(xì)胞未開封,,出現(xiàn)污染狀況我們負(fù)責(zé)免費發(fā)送一株細(xì)胞,。
二、如為貼壁細(xì)胞,,請在顯微鏡下觀察細(xì)胞密度:
1. 未超過80%匯合度時,,用75%酒精(建議配置75%酒精的水也是滅菌超純水,噴灑整個瓶消毒后放到超菌臺內(nèi),,嚴(yán)格無菌操作,;然后打開蓋子,先用槍頭把培養(yǎng)基吸出10ml左右,,放在離心管里,,然后瓶口過火(嚴(yán)禁直接傾倒),,這樣可以保證不污染,再用10ml的移液管,,將剩余的培液全部吸出,,放于離心管中,培養(yǎng)瓶中只剩余10ml左右培液就可以了,。培養(yǎng)16hr(時間根據(jù)細(xì)胞生長情況調(diào)整)之后,,傳代或者凍存。
2. 超過80%匯合度時,,請按細(xì)胞培養(yǎng)條件傳代培養(yǎng),。具體步驟如下:
1) 棄去培養(yǎng)液,用3ml PBS(不含鈣,,鎂離子)洗1-2次,;
2) 加1ml消化液(0.25%Trypsin-0.53mM EDTA)于T25培養(yǎng)瓶中,倒轉(zhuǎn)放于37度培養(yǎng)箱1-3分鐘預(yù)熱,,然后又將培養(yǎng)瓶倒轉(zhuǎn)大約30秒后,,在倒置顯微鏡下觀察細(xì)胞消化情況,若細(xì)胞大部分變圓分散,,輕敲幾下培養(yǎng)培養(yǎng)瓶,,細(xì)胞隨即脫落下來;
3) 加入6-8ml*培養(yǎng)基,,吸出,,分到新的培養(yǎng)瓶中,按要求分瓶,。
三,、如為懸浮細(xì)胞,吸出培養(yǎng)液,,1000轉(zhuǎn)/分鐘離心5分鐘,,吸出上清,管底細(xì)胞用新鮮培養(yǎng)基懸浮細(xì)胞后移回培養(yǎng)瓶,。
注意:換液時一半用我們的培養(yǎng)基,,一半用你們的,以免細(xì)胞不適應(yīng)而造成生長不好,。
四,、細(xì)胞出現(xiàn)問題,可重發(fā)的情況有哪些,?判定標(biāo)準(zhǔn)是什么,?
(1)細(xì)胞運輸途中遭遇的各種問題,,細(xì)胞丟失,、破損、漏液等,,重發(fā),;
(2)凍存的細(xì)胞復(fù)蘇后,,絕大多數(shù)細(xì)胞未存活,,重發(fā);
?。?)存活的細(xì)胞靜置24小時后,,絕大多數(shù)細(xì)胞未存活,重發(fā),;
?。?)凍存的細(xì)胞復(fù)蘇后或存活的細(xì)胞靜置4小時后并且未開封,出現(xiàn)污染,,重發(fā),;
(5)視具體情況而定,。
五,、細(xì)胞出現(xiàn)問題,不予以重發(fā)的情況有哪些,?
?。?)客戶造成細(xì)胞污染,不重發(fā),;
?。?)客戶不正確操作致細(xì)胞狀態(tài)不好,不重發(fā),;
?。?)細(xì)胞狀態(tài)不好,未提供細(xì)胞培養(yǎng)前3天照片的,,不重發(fā),;
(4)細(xì)胞培養(yǎng)時經(jīng)其它處理的,,不重發(fā),;
(5)細(xì)胞收到2天內(nèi),,未告知,,不重發(fā);
?。?)視具體情況而定,。
六,、售后服務(wù)政策
Acris abcam cst Biorbyt santa Novus sigma lifespan NEB roche ABI R&D millipore BD Qiagen Cayman Jackson Life GeneTex Bio-Rad DSHB tocris peprotech 等品牌;部分產(chǎn)品現(xiàn)貨,,超低比價,,另常備 Trizol DMSO lipo2000 lipo3000 SC-2004 SC-2005常備現(xiàn)貨 ;貨期短,,價格優(yōu),,售后齊全。
細(xì)胞污染問題,,請在收到產(chǎn)品48小時內(nèi),,給我們提出真實的實驗結(jié)果;細(xì)胞活性問題,,請在收到產(chǎn)品7天內(nèi)給我們提出真實的實驗結(jié)果,,我們調(diào)查核實后予免費調(diào)換,不收取任何費用,。
需要客戶關(guān)于293E細(xì)胞細(xì)胞培養(yǎng)說明,、細(xì)胞操作處理方法、細(xì)胞質(zhì)量問題反饋表,。
如用戶收到細(xì)胞8-30天之內(nèi),,因處理不當(dāng)造成細(xì)胞死亡或污染,我公司將優(yōu)惠價重新提供一株原細(xì)胞
* 293E細(xì)胞 * 質(zhì)量可靠,,售后有保障
★我?guī)旒?xì)胞近3000種,,來源于美國ATCC,細(xì)胞都是經(jīng)過嚴(yán)格質(zhì)量控制。
凍存細(xì)胞時間為5-7個工作日,,活細(xì)胞為7-15個工作日,。
★由于細(xì)胞庫現(xiàn)有細(xì)胞類目多,為了不出現(xiàn)混亂錯誤,,需要了解293E細(xì)胞相關(guān)細(xì)胞價格及詳細(xì)資料請老師,,對您造成的不便還請見諒!
(編輯:tanxi)