本公司提供中國倉鼠X小鼠B淋巴細(xì)胞雜交瘤產(chǎn)品訂購。上海乾思生化試劑網(wǎng)主營ATCC細(xì)胞,、ATCC細(xì)胞株,、ATCC細(xì)胞系,凍存復(fù)蘇細(xì)胞皆有,所供細(xì)胞成活率高,。如果您需要訂購細(xì)胞產(chǎn)品,,請與我們,我們將在12小時內(nèi)給您回復(fù),。
冷凍細(xì)胞操作步驟:
1.收集對數(shù)生長期細(xì)胞,;
2.以25μl臺盼藍(lán)溶液稀釋25μl細(xì)胞懸液;用血球計數(shù)板計數(shù)并計算細(xì)胞存活率(至少應(yīng)該在90%以上),;
3.細(xì)胞懸液在4℃ 條件下200磄離心10分鐘,;
4.將沉淀的細(xì)胞重新懸浮在冷凍液中(大約5?06細(xì)胞/0.5 ml 冷凍液);
5.將細(xì)胞懸液加入到冷凍管中,,每管0.5 ml,;
6.將冷凍管置于-80℃冰箱中;
7.24小時后,,將冷凍管移入液氮罐中,;
8.在記錄本或電腦中記錄下每一個冷凍管的位置以確保在以后應(yīng)用時能夠找到每一個冷凍管,。
細(xì)胞復(fù)蘇操作步驟:
1.將冷凍管迅速由液氮轉(zhuǎn)入到37℃水浴中,冷凍管的頂部保持在水面以上以避免任何污染,,不定時攪拌加速解凍,;
2.當(dāng)細(xì)胞*解凍后,用含70%乙醇的紗布擦拭冷凍管消毒,;
3.將解凍后細(xì)胞轉(zhuǎn)移到含4℃預(yù)平衡培養(yǎng)液的試管中,;
4.細(xì)胞懸液在4℃下200磄離心10分鐘;
5.棄上清,,將細(xì)胞重新懸浮在新鮮培養(yǎng)液中,;
6.將細(xì)胞轉(zhuǎn)移到細(xì)胞培養(yǎng)瓶,CO2孵箱中培養(yǎng),;
7.是用倒置顯微鏡檢查細(xì)胞存活率以及細(xì)胞密度,,如果細(xì)胞密度過高,用培養(yǎng)液稀釋至適宜濃度,。
培養(yǎng)條件:
*培養(yǎng)基:DMEM高糖培養(yǎng)基90%,;胎牛血清10%,。
培養(yǎng)條件:37.0C carbon dioxide(CO2),5%