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冷凍細(xì)胞操作步驟:
1.收集對數(shù)生長期細(xì)胞,;
2.以25μl臺盼藍(lán)溶液稀釋25μl細(xì)胞懸液,;用血球計(jì)數(shù)板計(jì)數(shù)并計(jì)算細(xì)胞存活率(至少應(yīng)該在90%以上);
3.細(xì)胞懸液在4℃ 條件下200磄離心10分鐘,;
4.將沉淀的細(xì)胞重新懸浮在冷凍液中(大約5?06細(xì)胞/0.5 ml 冷凍液),;
5.將細(xì)胞懸液加入到冷凍管中,每管0.5 ml,;
6.將冷凍管置于-80℃冰箱中,;
7.24小時后,將冷凍管移入液氮罐中,;
8.在記錄本或電腦中記錄下每一個冷凍管的位置以確保在以后應(yīng)用時能夠找到每一個冷凍管,。
培養(yǎng)條件:
*培養(yǎng)基:DMEM高糖培養(yǎng)基90%;胎牛血清10%,。
培養(yǎng)條件:37.0C carbon dioxide(CO2),5%