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人結(jié)腸癌轉(zhuǎn)基因細胞

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更新時間:2023-08-17 11:44:51瀏覽次數(shù):107

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冷凍細胞操作步驟:

1.收集對數(shù)生長期細胞;
2.以25μl臺盼藍溶液稀釋25μl細胞懸液,;用血球計數(shù)板計數(shù)并計算細胞存活率(至少應(yīng)該在90%以上),;
3.細胞懸液在4℃ 條件下200磄離心10分鐘;
4.將沉淀的細胞重新懸浮在冷凍液中(大約5?06細胞/0.5 ml 冷凍液),;
5.將細胞懸液加入到冷凍管中,,每管0.5 ml;
6.將冷凍管置于-80℃冰箱中,;
7.24小時后,,將冷凍管移入液氮罐中,;
8.在記錄本或電腦中記錄下每一個冷凍管的位置以確保在以后應(yīng)用時能夠找到每一個冷凍管。

細胞復(fù)蘇操作步驟:
1.將冷凍管迅速由液氮轉(zhuǎn)入到37℃水浴中,,冷凍管的頂部保持在水面以上以避免任何污染,,不定時攪拌加速解凍;
2.當(dāng)細胞*解凍后,,用含70%乙醇的紗布擦拭冷凍管消毒,;
3.將解凍后細胞轉(zhuǎn)移到含4℃預(yù)平衡培養(yǎng)液的試管中;
4.細胞懸液在4℃下200磄離心10分鐘,;
5.棄上清,,將細胞重新懸浮在新鮮培養(yǎng)液中;
6.將細胞轉(zhuǎn)移到細胞培養(yǎng)瓶,,CO2孵箱中培養(yǎng),;
7.是用倒置顯微鏡檢查細胞存活率以及細胞密度,如果細胞密度過高,,用培養(yǎng)液稀釋至適宜濃度,。


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