本公司提供人高轉(zhuǎn)移性肝癌細(xì)胞產(chǎn)品訂購,。上海乾思生化試劑網(wǎng)主營ATCC細(xì)胞、ATCC細(xì)胞株,、ATCC細(xì)胞系,凍存復(fù)蘇細(xì)胞皆有,,所供細(xì)胞成活率高。如果您需要訂購細(xì)胞產(chǎn)品,,請(qǐng)與我們,,我們將在12小時(shí)內(nèi)給您回復(fù)。
冷凍細(xì)胞操作步驟:
1.收集對(duì)數(shù)生長期細(xì)胞,;
2.以25μl臺(tái)盼藍(lán)溶液稀釋25μl細(xì)胞懸液,;用血球計(jì)數(shù)板計(jì)數(shù)并計(jì)算細(xì)胞存活率(至少應(yīng)該在90%以上);
3.細(xì)胞懸液在4℃ 條件下200磄離心10分鐘,;
4.將沉淀的細(xì)胞重新懸浮在冷凍液中(大約5?06細(xì)胞/0.5 ml 冷凍液),;
5.將細(xì)胞懸液加入到冷凍管中,每管0.5 ml,;
6.將冷凍管置于-80℃冰箱中,;
7.24小時(shí)后,將冷凍管移入液氮罐中,;
8.在記錄本或電腦中記錄下每一個(gè)冷凍管的位置以確保在以后應(yīng)用時(shí)能夠找到每一個(gè)冷凍管,。
細(xì)胞復(fù)蘇操作步驟:
1.將冷凍管迅速由液氮轉(zhuǎn)入到37℃水浴中,冷凍管的頂部保持在水面以上以避免任何污染,,不定時(shí)攪拌加速解凍,;
2.當(dāng)細(xì)胞*解凍后,用含70%乙醇的紗布擦拭冷凍管消毒,;
3.將解凍后細(xì)胞轉(zhuǎn)移到含4℃預(yù)平衡培養(yǎng)液的試管中,;
4.細(xì)胞懸液在4℃下200磄離心10分鐘;
5.棄上清,,將細(xì)胞重新懸浮在新鮮培養(yǎng)液中,;
6.將細(xì)胞轉(zhuǎn)移到細(xì)胞培養(yǎng)瓶,CO2孵箱中培養(yǎng),;
7.是用倒置顯微鏡檢查細(xì)胞存活率以及細(xì)胞密度,,如果細(xì)胞密度過高,用培養(yǎng)液稀釋至適宜濃度,。
培養(yǎng)條件:
*培養(yǎng)基:DMEM高糖培養(yǎng)基90%,;胎牛血清10%。
培養(yǎng)條件:37.0C carbon dioxide(CO2),5%
傳代方法:
收到細(xì)胞后,,取出培養(yǎng)瓶在倒置顯微鏡下觀察細(xì)胞生長情況,。