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當前位置:上海拜力生物科技有限公司>>技術文章>>端粒酶ELISA試劑盒 多種屬一步法檢測
●分子實驗中常用生化試劑原理匯總● 1.溶菌酶:它是糖苷水解酶,,能水解菌體細胞壁的主要化學成分肽聚糖中的β-1,4糖苷鍵,,因而具有溶菌的作用,。當溶液中pH小于8時,,溶菌酶作用受到抑制,。葡萄糖:增加溶液的粘度,,維持滲透壓,,防止DNA受機械剪切力作用而降解,。 EDTA:(1)螯合Mg2+、Ca2+等金屬離子,,抑制脫氧核糖核酸酶對DNA的降解作用(DNase作用時需要一定的金屬離子作輔基);(2)EDTA的存在,,有利于溶菌酶的作用,因為溶菌酶的反應要求有較低的離子強度的環(huán)境,。 2.NaOH-SDS液: NaOH:核酸在pH大于5,,小于9的溶液中,是穩(wěn)定的,。但當pH>12或pH<3時,,就會引起雙鏈之間氫鍵的解離而變性,。在溶液II中的NaOH濃度為0.2mo1/L,加抽提液時,,該系統(tǒng)的pH就高達12.6,,因而促使染色體DNA與質粒DNA的變性。 SDS:SDS是離子型表面活性劑,。它主要功能有:(1)溶解細胞膜上的脂質與蛋白,,因而溶解膜蛋白而破壞細胞膜。(2)解聚細胞中的核蛋白,。(3)SDS能與蛋白質結合成為R-O-SO3-…R+-蛋白質的復合物,,使蛋白質變性而沉淀下來。但是SDS能抑制核糖核酸酶的作用,,所以在以后的提取過程中,,必須把它去除干凈,防止在下一步操作中(用RNase去除RNA時)受到干擾,。 3. 3mol/L NaAc(pH4.8)溶液: NaAc的水溶液呈堿性,,為了調(diào)節(jié)pH至4.8,必須加入大量的冰醋酸,。所以該溶液實際上是NaAc-HAc的緩沖液,。用pH4.8的NaAc溶液是為了把pH12.6的抽提液,調(diào)回pH至中性,,使變性的質粒DNA能夠復性,,并能穩(wěn)定存在。而高鹽的3mol/L NaAc有利于變性的大分子染色體DNA,、RNA以及SDS-蛋白復合物凝聚而沉淀之,。前者是因為中和核酸上的電荷,減少相斥力而互相聚合,,后者是因為鈉鹽與SDS-蛋白復合物作用后,,能形成較小的鈉鹽形式復合物,使沉淀更*,。 4.為什么用無水乙醇沉淀DNA,?用無水乙醇沉淀DNA,這是實驗中常用的沉淀DNA的方法,。乙醇的優(yōu)點是可以任意比和水相混溶,,乙醇與核酸不會起任何化學反應,對DNA很安全,,因此是理想的沉淀劑,。 DNA溶液是DNA以水合狀態(tài)穩(wěn)定存在,當加入乙醇時,,乙醇會奪去DNA周圍的水分子,,使DNA失水而易于聚合,。一般實驗中,是加2倍體積的無水乙醇與DNA相混合,,其乙醇的終含量占67%左右,。因而也可改用95%乙醇來替代無水乙醇(因為無水乙醇的價格遠遠比95%乙醇昂貴)。但是加95%的乙醇使總體積增大,,而DNA在溶液中有一定程度的溶解,因而DNA損失也增大,,尤其用多次乙醇沉淀時,,就會影響收得率。折中的做法是初次沉淀DNA時可用95%乙醇代替無水乙酵,,后的沉淀步驟要使用無水乙醇,。也可以用0.6倍體積的異丙醇選擇性沉淀DNA。一般在室溫下放置15-30分鐘即可,。
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端粒酶ELISA試劑盒
檢測范圍:歡迎QQ或電話索取原版說明書.
產(chǎn)品規(guī)格:96T/48T,。
主要成分:酶標板,試劑,標準品等
經(jīng)營種類:進口分裝和原裝、國產(chǎn)
性狀:盒裝液體
試劑盒保存:2-8℃低溫保存,。
標本:血清,、、細胞上清液,、尿液,、體液、灌洗液,、腦脊髓,、心房水、胸房水,、組織等,。
ELISA常用的方法:雙抗體夾心法、間接法,、競爭法以及BAS-ELISA等,。
預期應用:ELISA法定量測定血清、,、細胞培養(yǎng)上清或其它相關生物液體中的含量,。
●做化驗時,標本采集時有哪些注意事項,?● 答:使用體外診斷試劑做化驗時,,血尿便等標本的采集不正確,會直接影響檢驗結果的準確性,。常見的不正確標本采集情況有: a.不是空腹采血(一般情況下,,化驗抽血要求空腹12小時左右,,此時結果穩(wěn)定,規(guī)定餐后采血的除外),; b.血標本溶血,、嚴重脂血,會對許多指標有影響,; c.用了抗生素以后再采集標本作細菌培養(yǎng),; d.未采集病理標本或標本中混有人體其他成分(如痰標本中混有唾液等); e.服用某些藥物后采集標本等,。
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編輯:小檀20181015
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