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如何選擇液相色譜保護柱
如何選擇液相色譜柱
來自于色譜系統(tǒng)的污染主要指,，HPLC儀器系統(tǒng)中部件磨損而產(chǎn)生的固體顆粒,，以及流動相系統(tǒng)過濾不*殘留的固體顆粒,。來自于樣品的污染主要指未*溶解的樣品或者已*溶解的樣品進入色譜系統(tǒng)中,，由于樣品溶劑和流動相溶劑對樣品溶解存在的溶解度差異,，導(dǎo)致沉淀析出污染系統(tǒng),。
特別是對于中藥 ,、天然產(chǎn)物,、合成中間體及生物藥品的檢測，因基質(zhì)的復(fù)雜性,，色譜柱受污染的情況會加嚴重,。污染會導(dǎo)致色譜系統(tǒng)壓力升高、色譜柱塌陷,、填料變色等,，從而帶來檢測成本高，測試結(jié)果不準確等各種影響,。
以下幾種情況見意使用保護柱：
1,、中藥、天然產(chǎn)物及合成中間體等基質(zhì)較復(fù)雜的樣品分析--因溶解性差異導(dǎo)致樣品析出而污染分析柱的情況比較嚴重,，梯度洗脫時影響大,。
2、生物樣品分析--因樣品的不可逆吸附導(dǎo)致的污染,，保護柱可先于分析柱承受這種污染,，從而延長分析柱壽命。
保護柱很重要,，但選擇合適的保護柱重要,，選擇或使用不當也可能帶來截然相反的效果。
保護柱分類及選擇
從材質(zhì)上分：不銹鋼材質(zhì)和PEEK(聚醚醚酮)材質(zhì),PEEK材質(zhì)優(yōu)缺點--樣品對金屬離子比較敏感時,，選擇PEEK材質(zhì)比較合適,，比如某些蛋白分板會用到PEEK材質(zhì)的分析柱，主要就是考慮到這方面的因素,；不銹鋼材質(zhì)優(yōu)缺點--大部分小分子化合物的分析,，選擇不銹鋼材質(zhì)保護柱居多,，特別是當流動相體系使用到四氫呋喃（THF）或DMSO等一些溶解性較強的溶劑時，必須選擇不銹鋼材質(zhì),，甚至對于HPLC系統(tǒng)的管路也需要替換成不銹鋼材質(zhì),，因THF對于PEEK管路有相當強的腐蝕作用。
從結(jié)構(gòu)上分：卡套式（柱芯+柱套）和直接填裝短柱
直接填裝短柱公優(yōu)缺點--這種結(jié)構(gòu)的保護柱實質(zhì)就是短柱優(yōu)缺點--這種的保護柱實質(zhì)就是短的色譜柱,，一般填裝的填料跟分析柱填料*一樣,，生物樣品分析中，用這種類型保護柱居多,，除可過濾一些不溶顆粒外,，還可除去一些在分析柱上易吸附的雜質(zhì)。缺點是,，一次性使用,，污染嚴重時，只能報廢,。
卡套式保護柱優(yōu)缺點--卡套式保護柱的柱套可反復(fù)使用,，柱芯污染后可替換，廠家會提倡配套瓣保護柱芯,，但購買時需要注意,，柱芯中有與分析柱匹配的填料，需要確認柱芯中的填料類型再購買,。同時,，柱芯與柱套需是來源一同一廠家的同一規(guī)格否則，會存在匹配上的差異,，導(dǎo)致峰型異?；蛘呗┮骸?/p>
從連接方式上分：獨立式和直連式
獨立式保護柱優(yōu)缺點
保護柱和分析柱這間用一段管路連接,，不用擔心與分析柱在連接上的匹配問題,。但使用管路連接時，連接不當容易產(chǎn)生死體積,。
直連式保護柱優(yōu)缺點--保護柱接口帶螺紋,，可直接與分析柱連接，死體積小,，UPLC分析時建議選擇直連式保護柱子缺點：購買時需保證接口與分析柱匹配,。
保護柱選擇考慮以下幾方面因素：
1：除非特殊情況，一般選擇填料基質(zhì)與分析柱基質(zhì)*相同的保護柱,。
2,、選擇保護柱尺寸可按柱體積計算，保護柱體積按分析柱體積的5%-10%即可,；如4.6*250mm的分析柱體積約為4ml,，保護柱體積可選擇在0.2-0.4ml之間為宜,。同時，保護柱內(nèi)徑應(yīng)與分析柱內(nèi)徑相同或相當,。
保護住使用注意事項：
1,、獨立式保護柱與分析柱連接時，連接管路盡可能短,，且接口切面平常,，盡量減少死體積以降低柱外展寬效應(yīng)。
2,、卡套式保護柱一般未標注液流方向,，使用時自行標注，并按照標注方向來使用,，以免正反向使用后,，截留的雜質(zhì)污染分析柱,。
3,、直接填裝的短柱型保護柱，出現(xiàn)柱壓升高或峰型變差時,，可不接分析柱進行反向清洗,，清洗溶劑可參考分析柱清洗溶劑。
4,、卡套式保護柱,，柱芯替換時，注意柱芯與柱套是否存在方向上的匹配,，同時不易旋擰過緊,，以防滑絲。
5,、保護柱或柱芯一般不建議超聲清洗,，因可能對填料表面修飾有影響。
6,、如同一保護柱配不同的分析柱使用,，每次使用前，保護柱需先清洗并用流動相平衡保護柱一段時間后,，再接分析柱使用,。
保護柱與柱前過濾器的區(qū)別和使用：
使用保護柱的目的在于延長分析柱的使用壽命，當分析柱造價昂貴時,，保護柱的價值尤其能體現(xiàn),，某些情況下，當使用的分析柱本身價格便宜,，保護柱并非必選,，推薦使用柱前過濾器合適,。
柱前過濾器與保護柱兩者外形相似，差異主要在于：保護柱內(nèi)芯裝有填料,，而柱前過濾器內(nèi)芯是可換的濾片（一般為帶也的不銹鋼燒結(jié)板）
因此,，從結(jié)構(gòu)可以推測使用上的差異：柱前過濾器--通用性強，任何分析柱前都有可使用,，因其濾芯只起到過濾和截留雜質(zhì)的作用,。濾片污染后可超聲清洗，反復(fù)使用,。
保護柱--柱中填料除了截留雜質(zhì)的作用外,，也可除去樣品中易吸附的雜質(zhì)，這一點對生物樣品分析尤其重要,。