熒光分光光度計(jì)是用于掃描液相熒光標(biāo)記物所發(fā)出的熒光光譜的一種儀器。其能提供包括激發(fā)光譜、發(fā)射光譜以及熒光強(qiáng)度,、量子產(chǎn)率,、熒光壽命、熒光偏振等許多物理參數(shù),,從各個(gè)角度反映了分子的成鍵和結(jié)構(gòu)情況,。熒光分光光度計(jì)具有靈敏度高、選擇性強(qiáng),、用樣量少,、方法簡(jiǎn)便、工作曲線線形范圍寬等優(yōu)點(diǎn),,可以廣泛應(yīng)用于生命科學(xué),、醫(yī)學(xué)、藥學(xué)和藥理學(xué),、有機(jī)和無(wú)機(jī)化學(xué)等領(lǐng)域,。
熒光分光光度計(jì)測(cè)試注意事項(xiàng):
①樣品應(yīng)盛在四面透光的石英比色皿(熒光池)中,,如果是揮發(fā)性樣品應(yīng)使用帶塞的熒光池,。
②在熒光分析時(shí),,為了得到穩(wěn)定可靠的數(shù)據(jù),,一般需要開(kāi)機(jī)預(yù)熱氙燈大約30min。如果儀器光源采用的是閃爍氙燈,,預(yù)熱時(shí)間可以縮短到10min左右,。對(duì)某些易感光、易分解的熒光物質(zhì),,盡量采用長(zhǎng)波長(zhǎng),、低人射光強(qiáng)度及短時(shí)間光照,。
?、蹨囟茸兓梢馃晒鈴?qiáng)度的改變。通常降低溫度,,有利于提高熒光量子產(chǎn)率,,熒光強(qiáng)度增大。溫度影響熒光強(qiáng)度的顯著程度因樣品而異,,大部分熒光物質(zhì)的熒光強(qiáng)度受溫度影響不大,,測(cè)試溫度變化不超過(guò)±3℃,對(duì)測(cè)試結(jié)果幾乎無(wú)影響,。
?、墚?dāng)熒光物質(zhì)是弱酸或弱堿時(shí),溶液的pH對(duì)熒光強(qiáng)度有較大影響。因?yàn)槿跛峄蛉鯄A在不同酸度中,,分子和離子的電離平衡會(huì)發(fā)生改變,,而熒光物質(zhì)的熒光強(qiáng)度會(huì)因其離解狀態(tài)發(fā)生改變。
?、轃晒馕镔|(zhì)分子與溶液中其它物質(zhì)分子之間作用導(dǎo)致熒光強(qiáng)度降低,,常見(jiàn)的熒光猝滅劑,如鹵素離子,、重金屬離子,、02、硝基化物質(zhì),、重氮化合物等,。溶液中的溶解氧也能引起幾乎所有的熒光物質(zhì)產(chǎn)生不同程度的熒光熄滅現(xiàn)象,因此,,在較嚴(yán)格的熒光實(shí)驗(yàn)中必須除02,。
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