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上海寶葉生物科技有限公司
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[器材和試劑]
● 去離子水（millipore）
● T4DNA連接酶和10×連接酶緩沖液（NEB）
● 16℃水浴
● 消化的scFv文庫DNA
● pHENl DNA,，用NcoI和NotI消化（100ng／ul）
● 電感受態(tài)大腸桿菌TGl細胞（Strat aeene）
● 用于將scFv文庫電轉化到大腸桿菌TGl株的試劑和設備
[方法]
1．配制1個50ul連接混合液，包含：
● 10×連接緩沖液,，5uI
● 水,，16ul
● NcoI和NotI消化的pHENl（100g／ul）， 20ul
● VcoI和NotI消化的scFv文庫（100g/ul）, 7ul
● T4 DNA連接酶（400U／ul）,，2ul
2．16℃孵育反應液過夜,。
3．乙醇沉淀DNA并用70％乙醇洗滌沉淀1次。
4．重懸DNA于10ul水中,。
5．用4份相同的2．5ul的DNA分別電轉化到電感受態(tài)大腸桿菌TGl細胞中,。
6．確定文庫容量，并將菌文庫材抖儲存于-70℃,。
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