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瘧疾(malaria)是瘧原蟲經(jīng)按蚊叮咬傳播的傳染病,,臨床上以間歇性寒戰(zhàn),、高熱、大汗和脾大,、貧血等為特征,,惡性瘧疾能引起兇險發(fā)作。常見檢測方法為間接熒光抗體染色法檢測瘧原蟲抗體,。
[檢測方法]
[方法學(xué)原理] 抗原片上加患者血清,,若血清中含有瘧原蟲抗體,,即可與抗原結(jié)合成相應(yīng)的抗原抗體復(fù)合物,此復(fù)合物再與熒光標(biāo)記抗人IgG抗體結(jié)合,,zui后通過熒光顯微鏡觀察熒光反應(yīng),。
[試劑]
1.0.01mol/LpH7.6 PBS
2.熒光標(biāo)記抗人IgG抗體
3.陰性對照、陽性對照血清
4.抗原片
[檢測步驟]
1.用鉛筆將抗原片(厚血膜)劃成12個小格,,放置蒸餾水中浸泡2~3min,,以脫去血紅蛋白,吹干,。
2.用無水乙醇固定10min,吹干,。
3.將被檢血清用PBS從1:10開始作倍比稀釋,,將此稀釋血清分別加在小格中,每格1小滴,,同時設(shè)陽性對照和陰性對照,。
4.將抗原片放濕盒中置37C環(huán)境中孵育30min,棄去殘余血清,,用PBS洗3次,,每次3min,用蒸餾水漂洗一遍以脫鹽,,吹干,。
5.將已稀釋的熒光標(biāo)記抗人IgG抗體加于各小格中心,每格1小滴,,同上孵育,,漂洗吹干,熒光顯微鏡檢,。
[結(jié)果判斷] 陽性結(jié)果小格內(nèi)有與原蟲胞漿結(jié)構(gòu)相似的明亮熒光,;陰性結(jié)果原蟲胞漿結(jié)構(gòu)模糊無熒光。陰陽性對照結(jié)果無誤,,實驗成立,。
[正常參考值] 正常人抗體效價≤1:10,但瘧疾流行區(qū)的正常人(成人)抗體效價稍高,。
[注意事項]
1.具有較多裂殖體的血片,,陽性檢出率高,因為瘧原蟲的裂殖體的抗原性zui強,。
2.采用厚血膜做抗原片時,,經(jīng)溶血后瘧原蟲容易變形,故觀察結(jié)果時要認(rèn)真辨認(rèn)(必要時可做瑞氏染色對照)以排除非特異性熒光,。
3.加被檢血清時,,要防止互相串格,。
[臨床意義] 被檢血清≥1:20陽性,表明瘧原蟲感染,。流行區(qū)人們抗體陽性檢出率較高,。有學(xué)者報道患者抗體陽性率為55.1%,明顯高于血膜染色檢查法(陽性率28.1%),。間日瘧患者經(jīng)*后熒光抗體的陽性率迅速下降,。值得注意的是,已*10余年的人群中尚有8%的人存在低滴度抗體水平,。由此可見,,本試驗結(jié)果陽性的意義不在于診斷,而在于流行病學(xué)調(diào)查,。