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dsGreen 是一種特異性結(jié)合雙鏈 DNA 的熒光染料,。染色方案有三種變體:凝膠浸泡、凝膠預(yù)染色和樣品預(yù)染色,。
凝膠浸泡
瓊脂糖和聚丙烯酰胺凝膠的經(jīng)典方法,。
在瓊脂糖或聚丙烯酰胺凝膠中運(yùn)行樣品。
在燒杯中,,將 10 µL 10,000× dsGreen DMSO 溶液添加至 100 mL 1× TE,、TBE 或 TAE 緩沖液(對(duì)于小型凝膠),或?qū)?50 µL 10,000× dsGreen DMSO 溶液添加至 500 mL 1 × TE,、TBE 或 TAE 緩沖液(用于中型凝膠),。用抹刀,、棒或磁力攪拌器充分混合。
將稀釋的 dsGreen 溶液倒入適當(dāng)?shù)耐斜P或平底鍋中,,并浸沒凝膠,。
將凝膠浸泡 5-10 分鐘。
使用可用光源和綠色/黃色濾光片查看或記錄凝膠,。藍(lán)光透射儀或紫外低壓汞燈 (254 nm) 可用于可視化 dsGreen 染色的凝膠,。也可以使用高壓汞燈(365 nm),但這種光源的激發(fā)效率稍低,。
凝膠預(yù)染色
該方法僅適用于瓊脂糖凝膠,,不適用于 PAAG。注意——這種染色方法有時(shí)會(huì)導(dǎo)致條帶變形或形成污點(diǎn),。在這種情況下使用凝膠浸泡,。
使用微波爐或加熱裝置將緩沖液中的瓊脂糖煮沸至溶解。
在仍為液體時(shí),,每 10 mL 凝膠溶液添加 1 µL 10,000× dsGreen DMSO 溶液,。充分混合。
倒入凝膠并使其凝固,。
為了獲得最佳結(jié)果,,在陽(yáng)極附近每 10 mL 緩沖液中添加 1 µL 10,000× dsGreen DMSO溶液(“+",紅線),。
運(yùn)行示例,。可以在 254 nm 低壓汞燈下實(shí)時(shí)監(jiān)測(cè)遷移帶,。
使用可用光源和綠色/黃色濾光片查看或記錄凝膠,。藍(lán)光透射儀或紫外低壓汞燈 (254 nm) 可用于可視化 dsGreen 染色的凝膠。也可以使用高壓汞燈(365 nm),,但這種光源的激發(fā)效率稍低,。
樣品預(yù)染色
不敏感、且經(jīng)濟(jì)的方法,。
在 DMSO 中混合 25 µL DMSO 和 1 µL 10,000× dsGreen 溶液,。
將 1 µL 溶液添加到每個(gè)要在瓊脂糖或聚丙烯酰胺凝膠上分離的樣品中。
運(yùn)行示例,??梢栽?254 nm 低壓汞燈下實(shí)時(shí)監(jiān)測(cè)遷移帶。
使用可用光源和綠色/黃色濾光片查看或記錄凝膠,。藍(lán)光透射儀或紫外低壓汞燈 (254 nm) 可用于可視化 dsGreen 染色的凝膠,。也可以使用高壓汞燈(365 nm),但這種光源的激發(fā)效率稍低。