您好, 歡迎來到化工儀器網(wǎng)
如何利用超微量分光光度計(jì)判斷RNA質(zhì)量？
閱讀：1026 發(fā)布時(shí)間：2022-9-20
在RNA的提取過程中,，外源物質(zhì)的引入、操作不規(guī)范,、內(nèi)外源性核酸酶的影響,，都會(huì)導(dǎo)致RNA的降解，影響提取質(zhì)量,。利用核酸電泳可以判斷RNA的完整性,，通過分光光度計(jì)可以驗(yàn)證RNA的濃度和純度。
在超微量分光光度計(jì)上,，加入1-2微升的RNA提取樣本就可以進(jìn)行光吸收的檢測。從結(jié)果中我們可以得到RNA的光譜圖,、濃度,、a260/280的比值、a260/230的比值,。
不同物質(zhì)有不同的吸收波長：
A260nm是核酸吸收峰的吸收波長,；A230nm是碳水化合物和鹽等的吸收波長；A280nm是蛋白和酚類物質(zhì)吸收峰的吸收波長,。
由于樣品差異,，我們提取的RNA濃度不一，需要根據(jù)目的基因表達(dá)水平及預(yù)實(shí)驗(yàn)來確定最合適的RNA濃度,。
除了濃度之外,，我們還會(huì)得到A260/280和A260/230兩個(gè)比值，這兩個(gè)參數(shù)是核酸純度的指示值,。
純凈的RNA樣品A260比A280接近2.0,。如果比值低于1.8,，表示存在蛋白或酚類物質(zhì)的影響；如果比值大于2.2,，表明RNA已經(jīng)發(fā)生了降解,。所以比值范圍在1.8-2.2這個(gè)范圍內(nèi)，結(jié)果都是合格的,。
純凈的RNA樣本的A260和A230的比值大于2.0,，若比值小于2.0，則表明樣品被碳水化合物（糖類）,、鹽類或有機(jī)溶劑污染,，需要純化樣品。
所以,，評判RNA的質(zhì)量,，一定要用超微量分光光度計(jì)對RNA濃度和純度的進(jìn)行驗(yàn)證哦。只有這些參數(shù)都在可用范圍之內(nèi),，提取到的RNA才是可用的,。