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一次移液操作一般有哪些步驟
閱讀：2942 發(fā)布時(shí)間：2018-10-30
步：裝吸頭,。移液器套柄用力下壓并小幅度旋轉(zhuǎn)即可
第二步：量程設(shè)定
1、移液器量程的設(shè)定原則：由大到??！
1)由大量程向小量程調(diào)節(jié)時(shí)：如從600μl調(diào)節(jié)至400μl，直接調(diào)節(jié),；
2)由小量程向大量程調(diào)節(jié)時(shí)：先朝所需量程方向連貫旋轉(zhuǎn),，旋轉(zhuǎn)到達(dá)超過(guò)所需量程1/3圈處，回調(diào)到所需量程處,。如從20μl調(diào)節(jié)至50μl,，先調(diào)節(jié)至60μl，再回旋至50μl,。
注：這是因?yàn)橛尚×砍滔虼罅砍陶{(diào)節(jié)時(shí),，彈簧的彈性形變?cè)诙虝r(shí)間內(nèi)無(wú)法*回復(fù)，需有一個(gè)恢復(fù)階段,，可以想象一下剛從沙發(fā)上起身時(shí),，沙發(fā)墊恢復(fù)原狀也是需要一定時(shí)間的。
*正確的量程設(shè)定可以提高0.5%的移液準(zhǔn)確性,！
2,、量程范圍的選擇
選擇量程時(shí),，需要注意，一般在 10%-100% 量程范圍內(nèi)可以操作,，但在 10% 量程操作需要較高的操作技巧,。因此建議的佳量程是35%-100% 量程范圍。在此量程范圍,，對(duì)操作技巧依賴更少,，并保證移液的準(zhǔn)確性和精度。從表中可以看出,，當(dāng)選擇的量程范圍越小,，移液的準(zhǔn)確性和重復(fù)性就會(huì)越差。
*選擇合適的吸頭量程,，可提高1%移液準(zhǔn)確性,！
第三步：潤(rùn)洗吸頭
用同一樣品對(duì)吸頭進(jìn)行潤(rùn)洗。先吸取樣品,，然后排回樣品池或廢液槽,。充分吸液排液2-3次。
潤(rùn)洗的作用：
1.在吸頭內(nèi)形成同質(zhì)膜,，降低吸頭對(duì)樣品的吸附,；
2.有助于提高吸頭多次相同移液操作的一致性。
注意：對(duì)于高溫/低溫樣品,，由于熱脹冷縮帶來(lái)更大的誤差,，不建議潤(rùn)洗。
*潤(rùn)洗吸頭可提高0.5%的移液準(zhǔn)確性!
第四步：吸液
此步影響移液準(zhǔn)確性的因素主要有以下4點(diǎn)：
1,、吸頭浸入角度：建議盡量保持垂直,，傾斜角度不大于15°。
*正確的移液角度,，可提高2.5%移液準(zhǔn)確性,！
2、吸頭的浸入深度：10μl以下的吸頭,，浸入深度為1-2mm,；10-200μl的吸頭，浸入深度為2-3mm,；200-2000μl的吸頭,，浸入深度為3-6mm；2000μl以上的吸頭,，浸入深度為6-10mm,。
*以正確吸頭浸入深度進(jìn)行吸液操作可提高1%的移液準(zhǔn)確性(微量程移液器可達(dá)5%)！
3,、吸頭浸入時(shí)間：吸液后保持吸頭浸入液面少1秒,，然后將吸頭平緩移開(kāi)液面,。對(duì)吸取大容量樣品或者高粘度樣品尤為重要。
4,、吸液速度：吸液通常采用一檔吸液,、二擋排液，在吸液時(shí)保持平順,，緩慢松開(kāi)活塞,，控制好吸液速度。過(guò)快的吸液速度,，會(huì)導(dǎo)致形成氣柱,，使移液不準(zhǔn)確；樣品液進(jìn)入套柄,，對(duì)活塞和密封圈造成損傷,；帶入氣霧,，造成樣品交叉污染,。
*不正確的吸液速度會(huì)導(dǎo)致至少5%的準(zhǔn)確性下降！
第五步：排液和吹液
先將排液按鈕按至檔(排液檔),，略作停頓以后,，再按至第二檔(吹液檔)。
常規(guī)排液操作：
1.沿內(nèi)壁排液(常規(guī))
2.直接排入液面下:直接排入液面排液時(shí)要保持活塞下壓再離開(kāi)液面,，否則容易導(dǎo)致倒吸,！
3.在液面上方排液
*正確的排液技術(shù)提高1%的移液準(zhǔn)確性！