超微量分光光度計Z常見應(yīng)用有哪些
1,、核酸的定量
核酸的定量是超微量分光光度計使用頻率高的功能,。可以定量溶于緩沖液的寡核苷酸,,單鏈DNA,、雙鏈DNA,以及RNA,。核酸的高吸收峰的吸收波長260nm,。每種核酸的分子構(gòu)成不一,因此其換算系數(shù)不同,。定量不同類型的核酸,,事先要選擇對應(yīng)消光因子。如:1OD的吸光值分別相當于50μg/ml的dsDNA,,37μg/ml的ssDNA,,40μg/ml的RNA,30μg/ml的Olig,。測試后的吸光值經(jīng)過上述系數(shù)的換算,,從而得出相應(yīng)的樣品濃度。除了核酸濃度,,分光光度計顯示幾個非常重要的比值表示樣品的純度,,如A260/A280的比值,用于評估樣品的純度,,因為蛋白的吸收峰是280nm,。純凈的樣品,比值大于1.8(DNA)或者2.0(RNA),。如果比值低于1.8或者2.0,,表示存在蛋白質(zhì)或者酚類物質(zhì)的影響。A230表示樣品中存在一些污染物,如碳水化合物,,多肽,苯酚等,,較純凈的核酸A260/A230的比值大于2.0,。
2、UV-VIS常規(guī)可見-紫外檢測
全波長超微量分光光度計可以像普通的紫外-可見分光光度計一樣行使功能,。如BIO-DL MicroDrop可以顯示從185到910nm的光波下樣品的吸光值,。多可以同時檢測40個波長下的吸光值并把數(shù)據(jù)顯示在報告中。
3,、蛋白質(zhì)的直接定量(UV法)
這種方法是在280nm波長,,直接測試蛋白。蛋白質(zhì)測定過程非常簡單,,先測試空白液,,然后直接測試蛋白質(zhì)。蛋白質(zhì)直接定量方法,,適合測試較純凈,、成分相對單一的蛋白質(zhì)。紫外直接定量法相對于比色法來說,,速度快,,操作簡單;但是容易受到平行物質(zhì)的干擾,,如DNA的干擾,;另外敏感度低,要求蛋白的濃度較高,。
4,、比色法蛋白質(zhì)定量
蛋白質(zhì)通常是多種蛋白質(zhì)的化合物,比色法測定的基礎(chǔ)是蛋白質(zhì)構(gòu)成成分:氨基酸(如酪氨酸,,絲氨酸)與外加的顯色基團或者染料反應(yīng),,產(chǎn)生有色物質(zhì)。有色物質(zhì)的濃度與蛋白質(zhì)反應(yīng)的氨基酸數(shù)目直接相關(guān),,從而反應(yīng)蛋白質(zhì)濃度,。
5、細菌細胞密度(OD600)
實驗室確定細菌生長密度和生長期,,多根據(jù)經(jīng)驗和目測推斷細菌的生長密度,。在遇到要求較高的實驗,需要采用分光光度計準確測定細菌細胞密度,。OD600是追蹤液體培養(yǎng)物中微生物生長的標準方法,。