今天小編給大家講講影響等溫滴定量熱儀基線位置的因素有哪些?
等溫滴定量熱法是近年來發(fā)展起來的研究生物熱力學和生物動力學的重要方法,。它通過高靈敏度自動微量熱計連續(xù),、準確地監(jiān)測和記錄變化過程的量熱曲線，同時提供原位,、在線和無損的熱力學和動力學信息
1,、在使用過程中會出現(xiàn)基線位置變化的問題。這里列出了影響基線位置的一些主要因素1.1安裝ITC儀表時,，避免安裝在陽光直射的位置,，以免造成長期陽光直射，這將導致溫度沿著滴定儀傳輸?shù)綐悠烦?，并導致基線漂移
2,、不要長時間將空調(diào)直接吹到ITC的安裝位置，當空調(diào)安裝在基線
3,、處時，避免因不小心的手動操作而導致樣品漂移,，例如滴定針意外彎曲(滴定針放置在靜止位置時經(jīng)常發(fā)生,，但許多情況不容易發(fā)現(xiàn))，在滴定過程中,，彎曲的滴定針可能會繼續(xù)摩擦樣品池的側(cè)壁,，導致樣品池的溫升
4、安裝不到位或固定螺栓松動,。更換滴定針后,，滴定針可能安裝不到位(移液管底部的玻璃針管太長)，或長期使用后固定滴定針的螺栓可能松動,，導致滴定針下沉,，在滴定過程中，由于樣品池底部的滴定針長時間摩擦,，可能導致樣品池的溫度升高
5,、混合速率的影響,。不同的攪拌速度將導致不同的熱釋放(攪拌速度越高，溫度越高,，基線越低,，反之亦然)。通常,，在ITC實驗中,，我們設置了一個恒定的攪拌速度，這通常不會因為攪拌速度的變化而改變基線,。然而,，當由于某些移液管故障或高樣本粘度導致攪拌器旋轉(zhuǎn)不均勻時，樣本池的熱量可能會發(fā)生變化
6,、樣本池中存在氣泡,。這種現(xiàn)象可能是影響初始基線位置的最常見原因。樣本溫度和樣本添加技能可能會影響基線,。當樣品池中因溫度差(因為水的比熱容大于空氣的比熱容,，且氣泡占據(jù)水分子的位置，導致樣品池中的總比熱容降低)而增加樣品或脫氣而產(chǎn)生小氣泡時,，當向樣品池施加與參考池相同的功率時,，樣品池的溫度將略高于參考池的溫度，這使得傳感器“錯誤地認為”樣品池更熱,，這會降低樣品池的功率,，導致基線下降。憑借出色的操作技能,，實際初始基線和設定參考功率之間的差異通常約為0.1Cal/s,。當然，通常情況下,，±1 ucal/s初始基線位置的偏差是可以接受的,。需要注意的一個問題是，在處理含有洗滌劑的膜蛋白樣品(如Triton X100,、np40等)時,，建議一次小心添加樣品，不建議通過抽吸排出氣泡,，這可能會使問題更加嚴重
7,、參考細胞中存在氣泡。這種現(xiàn)象與上述現(xiàn)象正好相反
8,、基線顯示逐步下降,。當?shù)味ㄡ樦兄挥锌諝饣驑悠肺?填充時，在滴定過程中，隨著樣品的注入,，樣品池的比熱容量由于在樣品池中連續(xù)注入空氣而降低,，導致基線逐步下降;另一個可能的原因是連接滴定針的填充端口適配器(FPA)磨損，需要更換新的FPA;在用ITC研究酶動力學的過程中也會出現(xiàn)類似的現(xiàn)象,?？煽紤]反應物之間是否存在可能的催化過程
9、樣品池未滿,。當樣品池未*填充時,，隨著反應物逐漸注入滴定器，樣品池逐漸填充,，導致樣品池的比熱容逐漸增加,，基線逐步升高。因此,，請加滿280 UL樣品并排出氣泡,。
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