ITC等溫滴定量熱儀主要用于研究生物分子相互作用的完整熱力學(xué)參數(shù),,包括結(jié)合常數(shù),、結(jié)合位點數(shù)、摩爾結(jié)合焓,、摩爾結(jié)合熵,、摩爾恒壓熱容和動力學(xué)參數(shù),比如蛋白質(zhì)與核酸作用,。ITC的應(yīng)用范圍各種生物分子的相互作用,;酶促反應(yīng)動力學(xué);蛋白質(zhì)折疊/去折疊,;RNA折疊,。
ITC等溫滴定量熱儀儀器的特點和用途:
等溫滴定微量熱儀系統(tǒng)直接測量生物化學(xué)結(jié)合過程中釋放或吸收的熱量,然后計算出結(jié)合親和力,、化學(xué)計量,、焓和熵。樣品制備和系統(tǒng)優(yōu)化工作量最少,,數(shù)據(jù)生成快速,、方便。等溫滴定微量熱儀僅需少量樣品即可進(jìn)行各種研究,,包括表征小分子,、蛋白質(zhì)、抗體,、核酸,、脂類和其他生物分子的分子間相互作用,也可用于測量酶動力學(xué)。
ITC檢測方式與化學(xué)反應(yīng)中的酸堿滴定法相似,,在ITC測定中,,首先將一種反應(yīng)物置于一個溫控樣品池中,并通過一個熱電偶回路與一個參比池相偶聯(lián),,樣品池和參比池處于相同的外部環(huán)境,。特定的滴定劑(按實驗需要選擇)定量滴加到樣品池中,當(dāng)樣品與滴定劑發(fā)生反應(yīng)時,,樣品池和參比池的溫度會發(fā)生變化,,反應(yīng)變化的能量可以被ITC檢測儀靈敏地檢測出來,并通過正反饋或負(fù)反饋觸發(fā)恒溫裝置保持溫度恒定,。
如果要進(jìn)行分子間相互作用的研究,,如研究蛋白質(zhì)與蛋白質(zhì)的相互作用、蛋白質(zhì)與糖相互作用,、藥物與蛋白質(zhì)相互作用,、小分子物質(zhì)與蛋白質(zhì)間相互作用、酶促反應(yīng)動力學(xué)分析,、核酸與核酸相互作用,、核酸與小分子相互作用等,可以考慮運用等溫滴定量熱技術(shù)進(jìn)行檢測,。
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