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當(dāng)前位置:上海研謹(jǐn)生物科技有限公司> 供求商機(jī)> WBC1078H-猴外周血白細(xì)胞分離液試劑盒
產(chǎn)品名稱:猴外周血白細(xì)胞分離液試劑盒
(細(xì)胞培養(yǎng)及分子生物學(xué))說明書
【產(chǎn)品組成】
為方便廣大用戶使用,,試劑內(nèi)容如下:
名稱 產(chǎn)品編號 規(guī)格
A 各種動物外周血白細(xì)胞分離液 詳見附錄 1 2×100ml
B 紅細(xì)胞裂解液(贈品) NH4CL2009 100ml
C 全血及組織稀釋液(贈品) 2010C1119 100ml
D 細(xì)胞洗滌液(贈品) 2010X1118 100ml
注:本試劑內(nèi)容中各單品可根據(jù)貨號單獨(dú)購買,客戶可根據(jù)實(shí)際使用情況自行選擇購買,。
【預(yù)期用途】
適用于從動物抗凝血液中分離白細(xì)胞,,無菌條件下所分離的白細(xì)胞可用于分子生物學(xué)及
細(xì)胞培養(yǎng)等。本品僅供科研使用,。
【檢驗(yàn)原理】
本分離液為 FICOLL,、羥乙一基淀粉 550 與泛影酸葡甲胺的混合液??鼓嚎稍诜蛛x液
中分層,。離心時,在 FICOLL,、羥乙一基淀粉的作用下紅細(xì)胞與粒細(xì)胞聚集并迅速沉降,;此時,
白細(xì)胞仍處于分離液上層及分離液層,,紅細(xì)胞污染可通過紅細(xì)胞裂解液裂解紅細(xì)胞去除,。大
部分血小板可在細(xì)胞清洗低速離心過程中去除。
其他人及動物多種比重細(xì)胞分離液,,因不同種屬不同比重分離液的細(xì)胞離散系數(shù)及細(xì)胞
帶電不同,,用戶在制定分離液時應(yīng)提供所需分離液的比重、動物種屬及被分離細(xì)胞的名稱,。
【*但不提供的儀器及耗材】
可提供 400g 離心力的水平轉(zhuǎn)子離心機(jī),、15ml 玻璃離心管、吸管等,。
【注意事項(xiàng)】
1. 使用前,,本分離液需復(fù)溫至 18-22℃。為獲得*的實(shí)驗(yàn)結(jié)果,,在取血后 2 小時內(nèi)
進(jìn)行實(shí)驗(yàn),,血液提取后存放時間越長細(xì)胞活性越低。
2. 實(shí)驗(yàn)過程中,,如需稀釋血液或洗滌細(xì)胞,,不可使用含 Ca、Mg 離子的緩沖液及培養(yǎng)液,,其
成分會導(dǎo)致血細(xì)胞凝集大大降低細(xì)胞得率及純度。本公司生產(chǎn)的全血及組織稀釋液和細(xì)胞洗
滌液不含 Ca,、Mg 離子,、低內(nèi)毒素水平且含細(xì)胞和保護(hù)成分,推薦使用,。
3. *抗凝劑選擇:EDTA,、枸櫞酸,、肝素,其他抗凝劑也可使用,,但會影響細(xì)胞活性,。應(yīng)
注意在血液稀釋過程中去除抗凝劑體積。
4. 當(dāng)血液樣本粘度過高或血液樣本大于等于 3ml 時,,*稀釋方法:將血液于 18-22℃以
250g 離心 10 分鐘,,棄去血漿,補(bǔ)充添加全血及組織稀釋液(產(chǎn)品編號:2010C1119),,添
加量為所棄去血漿體積的 1.5-2 倍,,混勻備用。注:不當(dāng)?shù)南♂尫椒〞档图?xì)胞得率及活性,。
5. 實(shí)驗(yàn)操作時,,不可使用含粉手套、不可使用內(nèi)毒素含量過高的液體,,手套中的粉末顆粒
及高內(nèi)毒素會激活細(xì)胞從而降低細(xì)胞得率及活性,。
6. 本實(shí)驗(yàn)不可使用高聚合材質(zhì)(如聚苯乙烯)的塑料制品,其帶有的靜電作用將導(dǎo)致細(xì)胞
貼壁影響分離效果,。
7. 吸取過多的白細(xì)胞層及分離液層會導(dǎo)致分離液交界處的粒細(xì)胞被吸出從而使混雜的粒細(xì)
胞數(shù)量增加,。
8. 吸取過多的白細(xì)胞層上層溶液會導(dǎo)致血漿蛋白及血小板混雜。
9. 如需進(jìn)行細(xì)胞計(jì)數(shù),,則需血液貯藏時間不得多于 10 小時,,否則將導(dǎo)致細(xì)胞被激活,得率降低,。
10. 為去除所混雜的血小板,,可在分離液上層加上 4-20%蔗糖梯度等滲溶液進(jìn)行二次離心。
11. 細(xì)胞純度可在步驟 10 后使用瑞氏染色方法確定,,細(xì)胞活性可用臺盼藍(lán)處理后觀察,。
12. 如所實(shí)驗(yàn)后細(xì)胞得率或活性過低,請?zhí)旖驗(yàn)笠詫で髱椭?,具體
詳見“【生產(chǎn)企業(yè)】”項(xiàng)目下內(nèi)容,。
【檢驗(yàn)方法】
情況 A: 血液樣本小于 3ml 時,實(shí)驗(yàn)方法如下:
1. 取一支 15ml 離心管,,加入 3ml 分離液置于 18-22℃,。
2. 將血液樣本小心加于分離液之液面上。18-22℃,,400g 離心 20 分鐘,。低溫(如 4 度)離
心會降低細(xì)胞得率。
3. 離心后,,用吸管小心吸出分離液上層(包含白細(xì)胞的細(xì)胞層)0.5cm 以上的上清液部分,,
棄去,。
4. 用吸管小心吸取分離液層、白細(xì)胞層及紅細(xì)胞層置于另一新離心管內(nèi),。
5. 在步驟 4 中所得離心管中加入 10ml 細(xì)胞洗滌液(產(chǎn)品編號:2010X1118)混勻,。
6. 250g 離心 10 分鐘。
7. 棄上清,,沉淀使用紅細(xì)胞裂解液(Cat#:NH4CL2009)裂解紅細(xì)胞(裂解過程參見下述【紅
細(xì)胞裂解液使用說明】),。
8. 裂解后再經(jīng)三次洗滌去除紅細(xì)胞內(nèi)溶物和碎片后即為所需白細(xì)胞。
9.后以 0.5ml 后續(xù)試驗(yàn)所需相應(yīng)液體重懸細(xì)胞,。
情況 B: 血液樣本大于等于 3ml 時,,實(shí)驗(yàn)方法如下:
1. 首先按“【注意事項(xiàng)】第 4 條”所述方法稀釋血液樣本。
2. 取一支適當(dāng)?shù)碾x心管,,加入分離液(加入量與稀釋后的血液樣本體積相等),,置于
18-22℃。
3. 將經(jīng)稀釋處理的血液樣本小心加于分離液之液面上,。18-22℃,,400g 離心 20 分鐘。低溫
(如 4 度)離心會降低細(xì)胞得率,。注:加入血液樣本后,,樣本及分離液總體積不得超過
離心管總體積的三分之二。
4. 剩余步驟同“情況 A”中步驟 3 至步驟
【紅細(xì)胞裂解液使用說明】
本裂解液有別于市場上銷售的其它紅細(xì)胞裂解液,,其配方經(jīng)過本公司優(yōu)化在裂解紅細(xì)
胞的同時不損傷并在一定程度上保護(hù)淋巴細(xì)胞(lymphocyte)或其它有細(xì)胞核的細(xì)胞,,所獲
得的細(xì)胞可保持完好的生物活性和完整的細(xì)胞形態(tài)。另外,,本裂解液中無DNA及RNA酶,,配
合細(xì)胞分離液使用所提細(xì)胞可廣泛用于細(xì)胞培養(yǎng)及分子生物學(xué)實(shí)驗(yàn),請廣大用戶從優(yōu)選擇,。
紅細(xì)胞裂解液(Red Blood Cell Lysis Buffer),,也稱ACK Lysis Buffer,是一種用于
從人或鼠等的血液或組織細(xì)胞樣品中裂解并去除無細(xì)胞核紅細(xì)胞的溶液,。
本裂解液不適用于有細(xì)胞核紅細(xì)胞的裂解,,例如鳥或禽類的紅細(xì)胞。本裂解液經(jīng)過無菌
處理,,處理過的血液或組織細(xì)胞樣品可以用于后續(xù)的原代培養(yǎng),、細(xì)胞融合以及核酸或蛋白的
提取及各種常規(guī)的分析和檢測。
使用說明:
A. 對于組織細(xì)胞樣品:
a. 新鮮組織經(jīng)過膠原酶或胰酶等消化處理,,通過適當(dāng)方法分散成細(xì)胞懸液,,離心棄上清。
b. 加入3-5倍細(xì)胞體積的紅細(xì)胞裂解液,,輕輕吹打混勻,,裂解1-2分鐘。例如細(xì)胞沉淀的體
積為1ml,,則加入3-5ml的紅細(xì)胞裂解液,。本步驟在室溫或4度操作均可。
c. 400-500g離心5分鐘,,棄紅色上清,。4℃離心效果更佳。
d. 如果發(fā)現(xiàn)紅細(xì)胞裂解不*,,可以重復(fù)上述步驟2和步驟3一次,。通常極微量的紅細(xì)胞不
會影響后續(xù)的一些檢測。
e. 洗滌1-2次:加入適量PBS,、HBSS,、生理鹽水或無血清培養(yǎng)液,重懸沉淀,,400-500g離心
2-3分鐘,,棄上清??稍僦貜?fù)1次,,共洗滌1-2次。洗滌液的用量通常應(yīng)至少為細(xì)胞沉淀
體積的5倍,。4℃離心效果更佳,。
White Blood
Cell
f. 根據(jù)實(shí)驗(yàn)需要用適當(dāng)溶液重懸細(xì)胞沉淀后即可進(jìn)行計(jì)數(shù)等后續(xù)實(shí)驗(yàn)。
B. 對于組織細(xì)胞樣品無需洗滌的快速操作步驟:
a. 新鮮組織經(jīng)過膠原酶或胰酶等消化處理,,通過適當(dāng)方法分散成細(xì)胞懸液,,離心棄上清。
b. 對于0.2ml細(xì)胞沉淀加入1ml紅細(xì)胞裂解液,,輕輕吹打混勻,,裂解1-2分鐘。本步驟在室溫
或4度操作均可,。
c. 加入15-20ml PBS,、HBSS、生理鹽水或無血清培養(yǎng)液,,混勻,。
d. 400-500g離心5分鐘,棄紅色上清,。4℃離心效果更佳,。
e. 如果發(fā)現(xiàn)紅細(xì)胞裂解不*,可以重復(fù)上述步驟2和步驟3一次。通常極微量的紅細(xì)胞不
會影響后續(xù)的一些檢測,。
f. 根據(jù)實(shí)驗(yàn)需要用適當(dāng)溶液重懸細(xì)胞沉淀后即可進(jìn)行計(jì)數(shù)等后續(xù)實(shí)驗(yàn),。
注:對于常規(guī)步驟,多一步洗滌過程中的離心,,但可以節(jié)省洗滌液的用量,,并且洗滌效果也更好一些,同
時不需要大體積的離心管,??焖俨襟E少了一次離心,但洗滌效果略差一些,,同時需要大體積的離心管,。
C. 對于血液樣品:
a. 取新鮮抗凝血,400-500g離心5分鐘,,離心棄上清,。
b. 加入6-10倍細(xì)胞體積的紅細(xì)胞裂解液,輕輕吹打混勻,,裂解1-2分鐘,。例如細(xì)胞沉淀的體
積為1ml,則加入6-10ml的紅細(xì)胞裂解液,。本步驟在室溫或4度操作均可,。注意:對于鼠
的血液,裂解1-2分鐘已經(jīng)足夠,,對于人的外周血,,宜延長裂解時間至4-5分鐘,并且裂
解過程中宜適當(dāng)偶爾搖動以促進(jìn)紅細(xì)胞裂解,。
c. 400-500g離心5分鐘,,棄紅色上清。4℃離心效果更佳,。
d. 如果發(fā)現(xiàn)紅細(xì)胞裂解不*,,可以重復(fù)上述步驟2和步驟3一次。通常極微量的紅細(xì)胞不
會影響后續(xù)的一些檢測,。
e. 洗滌1-2次:加入適量PBS,、HBSS、生理鹽水或無血清培養(yǎng)液,,重懸沉淀,,400-500g離心
2-3分鐘,棄上清,??稍僦貜?fù)1次,共洗滌1-2次。洗滌液的用量通常應(yīng)至少為細(xì)胞沉淀
體積的5倍,。4℃離心效果更佳,。
f. 根據(jù)實(shí)驗(yàn)需要用適當(dāng)溶液重懸細(xì)胞沉淀后即可進(jìn)行計(jì)數(shù)等后續(xù)實(shí)驗(yàn)。
注:對于微量或少量的血液樣品,,可以在*步中不進(jìn)行離心棄上清的操作,,直接在第二步中加入10倍血
液體積的紅細(xì)胞裂解液,并在室溫或4℃裂解4-5分鐘,。對于鼠的血液,裂解4-5分鐘已經(jīng)足夠,,對于人的外
周血,,宜延長裂解時間至10分鐘,但通常不宜超過15分鐘,,并且裂解過程中宜適當(dāng)偶爾搖動以促進(jìn)紅細(xì)胞裂解,。后續(xù)步驟相同。
D. 對于血液樣品無需洗滌的快速操作步驟:
a. 每1ml新鮮抗凝血中加入10ml紅細(xì)胞裂解液,,輕輕吹打混勻,,裂解4-5分鐘。
溫或4度操作均可,。注意:對于鼠的血液,,裂解4-5分鐘已經(jīng)足夠,對于人的外周血,,宜
延長裂解時間至10分鐘,但通常不宜超過15分鐘,,并且裂解過程中宜適當(dāng)偶爾搖動以促
進(jìn)紅細(xì)胞裂解。
b. 加入20-30ml PBS,、HBSS,、生理鹽水或無血清培養(yǎng)液,,混勻,。
c. 400-500g離心5分鐘,,棄紅色上清,。4℃離心效果更佳,。
d. 如果發(fā)現(xiàn)紅細(xì)胞裂解不*,,可以重復(fù)上述步驟2和步驟3一次,。通常極微量的紅細(xì)胞不會影響后續(xù)的一些檢測,。
e. 根據(jù)實(shí)驗(yàn)需要用適當(dāng)溶液重懸細(xì)胞沉淀后即可進(jìn)行計(jì)數(shù)等后續(xù)實(shí)驗(yàn)。
注:對于常規(guī)步驟,,多一步洗滌過程的離心,但可以節(jié)省洗滌液的用量,,并且洗滌效果也更好一些,,同時
不需要大體積的離心管??焖俨襟E少了一次離心,,但洗滌效果略差一些,,同時需要大體積的離心管,。
【儲存條件及有效期】
18-25℃避光保存,有效期 2 年,。啟封后置 4℃保存,,溶液變渾濁或感染細(xì)菌時,,產(chǎn)品
失效,。本品為真空包裝,未啟封前置于 10℃ 以下易出現(xiàn)白色結(jié)晶,,影響分離效果。
【適用儀器】
半徑 15cm 水平轉(zhuǎn)子離心機(jī),。
【樣本要求】
本分離液要求血液為新鮮的抗凝血,,血液收集時應(yīng)無菌操作且在儲存,、處理和運(yùn)輸過
程中避免冷凍和冷藏,。
【參考值(參考范圍)】
本實(shí)驗(yàn)白細(xì)胞的提取率及純度均大于 80%,。
【檢驗(yàn)結(jié)果的解釋】
由于各品牌離心機(jī)的性能不同,國內(nèi)南北地區(qū)溫度環(huán)境和四季的差異,,可能影響分離效
果,,用戶可以調(diào)節(jié)離心轉(zhuǎn)數(shù)和離心的時間,,摸索*的分離條件(具體分離條件各實(shí)驗(yàn)室自
定),。
【檢驗(yàn)方法的局限性】
本試驗(yàn)要求,,在正常大氣壓下,樣本,、分離液及分離環(huán)境溫度為 18-22℃。本分離液在
低溫時呈較高密度,,在高溫時呈較低密度。
【產(chǎn)品性能指標(biāo)】
pH 7.0-7.5
滲透壓 280-340mOsmol/kg
無菌 直接接種培養(yǎng) 14 天后培養(yǎng)基澄清
澄明度及不溶性顆粒物 每 50ml 溶液中含 10μ m 以上的不溶性微粒 20 粒以下,,含
μ m 以上的不溶性微粒 5 粒以下
【參考文獻(xiàn)】
1 鄭德先,,吳克復(fù),,褚建新.現(xiàn)代實(shí)驗(yàn)血液學(xué)研究方法與技術(shù).北京醫(yī)科大學(xué)中國協(xié)和醫(yī)科大
學(xué)聯(lián)合出版社,,1999
2 鄂征.組織培養(yǎng).北京出版社,,1995
3 朱立平,,陳學(xué)清.免疫學(xué)常用實(shí)驗(yàn)方法.人民軍醫(yī)出版社,2000
貨號 | 品牌 | 產(chǎn)品名稱 | 規(guī)格 | 報(bào)價(jià) |
干細(xì)胞分離液 |
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LGS1073 | TBD | 人骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞分離液 | 200ml | 400 |
LGS1068 | TBD | 人外周血造血干細(xì)胞分離液 | 200ml | 400 |
LGS1072 | TBD | 大鼠骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞分離液 | 200ml | 400 |
LGS1072W | TBD | 大鼠外周血造血干細(xì)胞分離液 | 200ml | 400 |
LGS1081 | TBD | 小鼠骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞分離液 | 200ml | 400 |
LGS1081W | TBD | 小鼠外周血造血干細(xì)胞分離液 | 200ml | 400 |
LGS1090 | TBD | 兔骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞分離液 | 200ml | 400 |
LGS1090W | TBD | 兔外周血造血干細(xì)胞分離液 | 200ml | 400 |
LGS1072Z | TBD | 狗骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞分離液 | 200ml | 400 |
LGS1072GW | TBD | 狗外周血造血干細(xì)胞分離液 | 200ml | 400 |
LGS1082 | TBD | 牛骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞分離液 | 200ml | 400 |
LGS1082W | TBD | 牛外周血造血干細(xì)胞分離液 | 200ml | 400 |
LGS1080 | TBD | 豚鼠骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞分離液 | 200ml | 400 |
LGS1080W | TBD | 豚鼠外周血造血干細(xì)胞分離液 | 200ml | 400 |
LGS1086C | TBD | 雞骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞分離液 | 100ml | 400 |
LGS1086CW | TBD | 雞外周血造血干細(xì)胞分離液 | 100ml | 400 |
LGS1074 | TBD | 猴骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞分離液 | 200ml | 400 |
LGS1074W | TBD | 猴外周血造血干細(xì)胞分離液 | 200ml | 400 |
LGS1106 | TBD | 豬骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞分離液 | 100ml | 400 |
LGS1106W | TBD | 豬外周血造血干細(xì)胞分離液 | 100ml | 400 |
LGS1090H | TBD | 馬骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞分離液 | 100ml | 400 |
LGS1090HW | TBD | 馬外周血造血干細(xì)胞分離液 | 100ml | 400 |
LGS1083 | TBD | 羊骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞分離液 | 100ml | 400 |
LGS1083W | TBD | 羊外周血造血干細(xì)胞分離液 | 100ml | 400 |
LGS1076F | TBD | 魚干細(xì)胞分離液 | 100ml | 400 |
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