人肌鈣蛋白（Tn）ELISA試劑盒使用說明

肌鈣蛋白（Tn）試劑盒用于測定人血清，血漿及相關(guān)液體樣本中肌鈣蛋白（Tn）含量,。

肌鈣蛋白實驗原理：

   本試劑盒應(yīng)用雙抗體夾心法測定標本中人肌鈣蛋白（Tn）水平,。用純化的人肌鈣蛋白（Tn）

抗體包被微孔板，制成固相抗體,，往包被單抗的微孔中依次加入肌鈣蛋白（Tn）,，再與 HRP

標記的肌鈣蛋白（Tn）抗體結(jié)合，形成抗體-抗原-酶標抗體復(fù)合物,，經(jīng)過*洗滌后加底物

TMB 顯色,。TMB 在 HRP 酶的催化下轉(zhuǎn)化成藍色,，并在酸的作用下轉(zhuǎn)化成zui終的黃色。顏

色的深淺和樣品中的肌鈣蛋白（Tn）呈正相關(guān)。用酶標儀在 450nm 波長下測定吸光度（OD

值）,，通過標準曲線計算樣品中人肌鈣蛋白（Tn）含量,。

試劑盒組成：

試劑盒組成 48 孔配置 96 孔配置 保存

說明書 1 份 1 份

封板膜 2 片（48） 2 片（96）

密封袋 1 個 1 個

酶標包被板 1×48 1×96 2-8℃保存

標準品：900ng/L 0.5ml×1 瓶 0.5ml×1 瓶 2-8℃保存

標準品稀釋液 1.5ml×1 瓶 1.5ml×1 瓶 2-8℃保存

酶標試劑 3 ml×1 瓶 6 ml×1 瓶 2-8℃保存

樣品稀釋液 3 ml×1 瓶 6 ml×1 瓶 2-8℃保存

顯色劑A 液 3 ml×1 瓶 6 ml×1 瓶 2-8℃保存

顯色劑B液 3 ml×1 瓶 6 ml×1 瓶 2-8℃保存

終止液 3ml×1 瓶 6ml×1 瓶 2-8℃保存

20 倍濃縮洗滌液 20ml×1 瓶 30ml×1 瓶 2-8℃保存

樣本處理及要求：

1. 血清：室溫血液自然凝固10-20分鐘,，離心20分鐘左右（2000-3000轉(zhuǎn)/分）,。仔細收集上

清，保存過程中如出現(xiàn)沉淀,，應(yīng)再次離心,。

2. 血漿：應(yīng)根據(jù)標本的要求選擇 EDTA 或檸檬酸鈉作為抗凝劑，混合 10-20 分鐘后,，離心

20 分鐘左右（2000-3000 轉(zhuǎn)/分）,。仔細收集上清，保存過程中如有沉淀形成,，應(yīng)該再次

離心,。

3. 尿液：用無菌管收集,，離心 20 分鐘左右（2000-3000 轉(zhuǎn)/分）。仔細收集上清,，保存過程

中如有沉淀形成,，應(yīng)再次離心。胸腹水,、腦脊液參照實行,。

4. 細胞培養(yǎng)上清：檢測分泌性的成份時，用無菌管收集,。離心20分鐘左右（2000-3000轉(zhuǎn)/

分）,。仔細收集上清。檢測細胞內(nèi)的成份時,，用 PBS（PH7.2-7.4）稀釋細胞懸液,，細胞

濃度達到100萬/ml左右,。通過反復(fù)凍融,，以使細胞破壞并放出細胞內(nèi)成份。離心20分

鐘左右（2000-3000轉(zhuǎn)/分）,。仔細收集上清,。保存過程中如有沉淀形成，應(yīng)再次離心,。

5. 組織標本：切割標本后,，稱取重量。加入一定量的PBS,，PH7.4,。用液氮迅速冷凍保存?zhèn)?/span>

用。標本融化后仍然保持 2-8℃的溫度,。加入一定量的 PBS（PH7.4）,，用手工或勻漿器

將標本勻漿充分。離心 20 分鐘左右（2000-3000 轉(zhuǎn)/分）,。仔細收集上清,。分裝后一份待

檢測，其余冷凍備用,。

6. 標本采集后盡早進行提取,，提取按相關(guān)文獻進行，提取后應(yīng)盡快進行實驗,。若不能馬上

進行試驗,，可將標本放于-20℃保存，但應(yīng)避免反復(fù)凍融.

7.  不能檢測含NaN3的樣品,，因 NaN3抑制辣根過氧化物酶的（HRP）活性,。

肌鈣蛋白操作步驟

1. 標準品的稀釋與加樣：在酶標包被板上設(shè)標準品孔 10 孔,，在*、第二孔中分別加標

準品 100μl,，然后在*,、第二孔中加標準品稀釋液50μl，混勻,；然后從*孔,、第二

孔中各取100μl分別加到第三孔和第四孔，再在第三,、第四孔分別加標準品稀釋液50μl,，

混勻；然后在第三孔和第四孔中先各取50μl棄掉,，再各取50μl分別加到第五,、第六孔

中，再在第五,、第六孔中分別加標準品稀釋液50ul,，混勻；混勻后從第五,、第六孔中各

取 50μl 分別加到第七,、第八孔中，再在第七,、第八孔中分別加標準品稀釋液 50μl,，混

勻后從第七、第八孔中分別取 50μl 加到第九,、第十孔中,，再在第九第十孔分別加標準

品稀釋液50μl，混勻后從第九第十孔中各取50μl棄掉,。（稀釋后各孔加樣量都為50μl,，

濃度分別為600ng/L，400ng/L ,，200ng/L,，100ng/L，50ng/L）,。

2. 加樣：分別設(shè)空白孔（空白對照孔不加樣品及酶標試劑,，其余各步操作相同）、待測樣

品孔,。在酶標包被板上待測樣品孔中先加樣品稀釋液40μl,，然后再加待測樣品10μl（樣

品zui終稀釋度為 5 倍）。加樣將樣品加于酶標板孔底部，盡量不觸及孔壁,，輕輕晃動混

勻,。3. 溫育：用封板膜封板后置37℃溫育30 分鐘。

4. 配液：將20倍濃縮洗滌液用蒸餾水20倍稀釋后備用,。

5. 洗滌：小心揭掉封板膜,，棄去液體，甩干,，每孔加滿洗滌液,，靜置 30 秒后棄去，如此

重復(fù) 5次,，拍干,。

6. 加酶：每孔加入酶標試劑50μl，空白孔除外,。

7. 溫育：操作同 3,。

8. 洗滌：操作同 5。

9. 顯色：每孔先加入顯色劑 A50μl,，再加入顯色劑 B50μl,，輕輕震蕩混勻，37℃避光顯色

15分鐘.

10. 終止：每孔加終止液50μl,，終止反應(yīng)（此時藍色立轉(zhuǎn)黃色）,。

11. 測定：以空白空調(diào)零,，450nm波長依序測量各孔的吸光度（OD值）,。 測定應(yīng)在加終止

液后 15分鐘以內(nèi)進行。

肌鈣蛋白注意事項：

1．試劑盒從冷藏環(huán)境中取出應(yīng)在室溫平衡15-30分鐘后方可使用,，酶標包被板開封后如未

用完,，板條應(yīng)裝入密封袋中保存。

2．濃洗滌液可能會有結(jié)晶析出,，稀釋時可在水浴中加溫助溶,，洗滌時不影響結(jié)果。

3．各步加樣均應(yīng)使用加樣器,，并經(jīng)常校對其準確性,，以避免試驗誤差。一次加樣時間

控制在5 分鐘內(nèi),，如標本數(shù)量多,，推薦使用排槍加樣。

4．請每次測定的同時做標準曲線,，做復(fù)孔,。如標本中待測物質(zhì)含量過高（樣本OD值

大于標準品孔*孔的OD值），請先用樣品稀釋液稀釋一定倍數(shù)（n 倍）后再測定,，計

算時請zui后乘以總稀釋倍數(shù)（×n×5）,。

5．封板膜只限一次性使用,，以避免交叉污染。

6．底物請避光保存,。7．嚴格按照說明書的操作進行,，試驗結(jié)果判定必須以酶標儀讀數(shù)為準.

8．所有樣品，洗滌液和各種廢棄物都應(yīng)按傳染物處理,。

9．本試劑不同批號組分不得混用,。

10.  如與英文說明書有異，以英文說明書為準,。

計算：

以標準物的濃度為橫坐標,，OD值為縱坐標，    

在坐標紙上繪出標準曲線,，根據(jù)樣品的OD     

值由標準曲線查出相應(yīng)的濃度,；再乘以稀釋     

倍數(shù)；或用標準物的濃度與OD值計算出標     

準曲線的直線回歸方程式,，將樣品的OD值     

代入方程式,，計算出樣品濃度，再乘以稀釋     

倍數(shù),，即為樣品的實際濃度,。

試劑盒性能：

1.樣品線性回歸與預(yù)期濃度相關(guān)系數(shù)R值為0.990以上。

2.批內(nèi)與批見應(yīng)分別小于9%和 11%

保存條件及有效期：

1.試劑盒保存：2-8℃,。

2．有效期：6個月

大鼠腎素（Renin）elisa檢測試劑盒