雞禽流感病毒抗體檢測(cè)試劑盒（檢血清）

產(chǎn)品介紹

   雞禽流感病毒抗體檢測(cè)試劑盒檢測(cè)雞血清中的禽流感病毒抗體，用于評(píng)估養(yǎng)雞場(chǎng)雞禽流感疫苗免疫狀況及感染雞的血清學(xué)輔助診斷。

本試劑盒采用間接ELISA法,，在酶標(biāo)板微孔上預(yù)包被禽流感抗原,。在試驗(yàn)中，加入稀釋后的待檢血清,，經(jīng)過(guò)溫育后，若樣品中含有禽流感特異性抗體,，則與包被板上的抗原結(jié)合,，經(jīng)洗滌除去未結(jié)合的抗體和其他成分后；加入酶標(biāo)二抗,，與檢測(cè)板上的抗原抗體復(fù)合物發(fā)生特異性結(jié)合,；再經(jīng)洗滌除去未結(jié)合的酶結(jié)合物,；在微孔中加入TMB底物液，經(jīng)酶催化形成藍(lán)色產(chǎn)物,，加入終止液終止反應(yīng)后,，用酶標(biāo)儀450nm波長(zhǎng)測(cè)定反應(yīng)孔中的吸光度A值。

組份

需自備的設(shè)備及試劑

1.    微量移液器： 0.5µl--10µl,、10µl--100µl,、100µl--1000µl。

2.    一次性移液器吸頭,。

3.    量筒：500ml,。

4.    96孔板酶標(biāo)儀。

5.    蒸餾水或去離子水,。

6.    洗瓶或洗板機(jī),。

樣品制備

取動(dòng)物全血，按常規(guī)方法制備血清,，要求血清清亮,，無(wú)溶血。

洗滌液的準(zhǔn)備

    濃縮洗滌液使用前應(yīng)恢復(fù)至室溫,，如有鹽結(jié)晶,，搖動(dòng)使結(jié)晶的鹽溶解，然后用蒸餾水或去離子水作10倍稀釋,。稀釋好的洗滌液可在4℃存放一周左右,。

樣品的稀釋

在血清稀釋板中按1：101的體積比稀釋待檢血清（例如：200μl樣品稀釋液中加2μl待檢血清）。

注意：陰性和陽(yáng)性對(duì)照不用稀釋,。取每個(gè)樣品后都要更換吸頭,，準(zhǔn)確記錄每個(gè)樣品在板上的位置。每個(gè)樣品在加入到包被板微孔前應(yīng)充分混勻,。

注意事項(xiàng)

1.    試劑盒使用前各試劑應(yīng)平衡至室溫,，使用前應(yīng)搖勻，使用后放回2～8℃,。

2.    不同品種,、不同批號(hào)試劑盒的試劑組分不得混用，使用試劑時(shí)應(yīng)防止試劑污染,。

3.    底物和終止液對(duì)皮膚和眼可能有刺激性,，使用時(shí)應(yīng)該注意防護(hù)。

4.    TMB（底物B液）不要暴露于強(qiáng)光和避免接觸氧化劑,。

5.    檢測(cè)板拆封后應(yīng)避免受潮或沾水(未用完的抗原包被板加干燥劑放于自封袋中,，并盡快置于2～8℃)。

6.    所有廢棄物在丟棄之前應(yīng)合理處理以免污染,。

7.    嚴(yán)格遵守操作說(shuō)明可以獲得h的結(jié)果,。操作過(guò)程中移液,、定時(shí)和洗滌等的全部過(guò)程必須精q。

8.    血清稀釋板為一次性用品,，不得重復(fù)使用,；血清稀釋板的大容量為300μl/孔。

操作步驟

1.    取預(yù)包被的檢測(cè)板（根據(jù)樣品多少,，可拆開(kāi)分次使用）,，將稀釋好的待檢血清取100μl加入到檢測(cè)板孔中。同時(shí)設(shè)陰性,、陽(yáng)性及空白對(duì)照各1孔,，取陰性及陽(yáng)性對(duì)照各100μl

分別加入反應(yīng)孔中，空白對(duì)照僅加入100μl樣本稀釋液,。輕輕振勻孔中樣品（勿溢出）,。

2.    蓋上封板膜，置37℃溫育30分鐘,。

3.    小心揭開(kāi)封板膜,，甩掉板孔中的溶液，用洗滌液洗3次,。每次用洗滌液注滿板孔（約350μl）,，靜置1分鐘后甩掉。洗滌3次后在干凈吸水紙上拍干,。

4.    每孔加酶結(jié)合物100μl,，蓋上封板膜，置37℃溫育30分鐘,。

5.    小心揭開(kāi)封板膜,，甩掉板孔中的溶液，洗滌3次, 方法同2,。切記后在干凈吸水紙上拍干,。

6.    每孔先加底物A液50µl、再加底物B液50µl,，混勻,、蓋上封板膜37℃閉光顯色10分鐘。

7.    每孔加終止液50μl,，使反應(yīng)終止,，10分鐘內(nèi)測(cè)定結(jié)果。

結(jié)果判定

以空白對(duì)照調(diào)零用酶標(biāo)儀于450nm（630nm作參比波長(zhǎng)）讀取吸光度A值,。試驗(yàn)成立的條件是陽(yáng)性對(duì)照孔A450值大于或等于0.5,，陰性對(duì)照孔A450值必須小于0.2。如果試驗(yàn)無(wú)效,，試驗(yàn)中的操作值得懷疑,，試驗(yàn)應(yīng)重做，并仔細(xì)檢察各組分,。

樣品A450值大于0.25+陰性對(duì)照孔均值,，判為陽(yáng)性；樣品A450值小于0.25+陰性對(duì)照孔均值,，判為陰性,；如陰性對(duì)照孔均值小于0.05按0.05計(jì)算。

有效期

貯存方法： 2 - 8ºC下貯存,。

有效期： 12個(gè)月,。

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