雞禽流感病毒抗體檢測試劑盒（檢血清）

產品介紹

   雞禽流感病毒抗體檢測試劑盒檢測雞血清中的禽流感病毒抗體，用于評估養(yǎng)雞場雞禽流感疫苗免疫狀況及感染雞的血清學輔助診斷,。

本試劑盒采用間接ELISA法,，在酶標板微孔上預包被禽流感抗原,。在試驗中，加入稀釋后的待檢血清,，經過溫育后,，若樣品中含有禽流感特異性抗體，則與包被板上的抗原結合,，經洗滌除去未結合的抗體和其他成分后,；加入酶標二抗，與檢測板上的抗原抗體復合物發(fā)生特異性結合,；再經洗滌除去未結合的酶結合物,；在微孔中加入TMB底物液，經酶催化形成藍色產物,，加入終止液終止反應后,，用酶標儀450nm波長測定反應孔中的吸光度A值。

組份

需自備的設備及試劑

1.    微量移液器： 0.5µl--10µl,、10µl--100µl,、100µl--1000µl。

2.    一次性移液器吸頭,。

3.    量筒：500ml,。

4.    96孔板酶標儀。

5.    蒸餾水或去離子水,。

6.    洗瓶或洗板機,。

樣品制備

取動物全血，按常規(guī)方法制備血清,，要求血清清亮,，無溶血。

洗滌液的準備

    濃縮洗滌液使用前應恢復至室溫,，如有鹽結晶,，搖動使結晶的鹽溶解，然后用蒸餾水或去離子水作10倍稀釋,。稀釋好的洗滌液可在4℃存放一周左右,。

樣品的稀釋

在血清稀釋板中按1：101的體積比稀釋待檢血清（例如：200μl樣品稀釋液中加2μl待檢血清）。

注意：陰性和陽性對照不用稀釋,。取每個樣品后都要更換吸頭,，準確記錄每個樣品在板上的位置。每個樣品在加入到包被板微孔前應充分混勻,。

注意事項

1.    試劑盒使用前各試劑應平衡至室溫,，使用前應搖勻，使用后放回2～8℃。

2.    不同品種,、不同批號試劑盒的試劑組分不得混用,，使用試劑時應防止試劑污染。

3.    底物和終止液對皮膚和眼可能有刺激性,，使用時應該注意防護,。

4.    TMB（底物B液）不要暴露于強光和避免接觸氧化劑。

5.    檢測板拆封后應避免受潮或沾水(未用完的抗原包被板加干燥劑放于自封袋中,，并盡快置于2～8℃),。

6.    所有廢棄物在丟棄之前應合理處理以免污染。

7.    嚴格遵守操作說明可以獲得h的結果,。操作過程中移液,、定時和洗滌等的全部過程必須精q。

8.    血清稀釋板為一次性用品,，不得重復使用,；血清稀釋板的大容量為300μl/孔。

操作步驟

1.    取預包被的檢測板（根據(jù)樣品多少,，可拆開分次使用）,，將稀釋好的待檢血清取100μl加入到檢測板孔中。同時設陰性,、陽性及空白對照各1孔,，取陰性及陽性對照各100μl

分別加入反應孔中，空白對照僅加入100μl樣本稀釋液,。輕輕振勻孔中樣品（勿溢出）,。

2.    蓋上封板膜，置37℃溫育30分鐘,。

3.    小心揭開封板膜,，甩掉板孔中的溶液，用洗滌液洗3次,。每次用洗滌液注滿板孔（約350μl）,，靜置1分鐘后甩掉。洗滌3次后在干凈吸水紙上拍干,。

4.    每孔加酶結合物100μl,，蓋上封板膜，置37℃溫育30分鐘,。

5.    小心揭開封板膜,，甩掉板孔中的溶液，洗滌3次, 方法同2,。切記后在干凈吸水紙上拍干,。

6.    每孔先加底物A液50µl,、再加底物B液50µl,，混勻,、蓋上封板膜37℃閉光顯色10分鐘。

7.    每孔加終止液50μl,，使反應終止,，10分鐘內測定結果。

結果判定

以空白對照調零用酶標儀于450nm（630nm作參比波長）讀取吸光度A值,。試驗成立的條件是陽性對照孔A450值大于或等于0.5,，陰性對照孔A450值必須小于0.2。如果試驗無效,，試驗中的操作值得懷疑,，試驗應重做，并仔細檢察各組分,。

樣品A450值大于0.25+陰性對照孔均值,，判為陽性；樣品A450值小于0.25+陰性對照孔均值,，判為陰性,；如陰性對照孔均值小于0.05按0.05計算。

有效期

貯存方法： 2 - 8ºC下貯存,。

有效期： 12個月,。

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