大鼠C肽(C-P)酶聯(lián)免疫分析(ELISA)elisa檢測試劑盒

本試劑盒用于測定大鼠血清，血漿及相關(guān)液體樣本中C肽(C-P)含量,。

標本處理及要求

 1．血清,、血漿標本可直接測定；

2．尿液,、腦脊液,、腹腔液：2000-3000轉(zhuǎn)/分離心10分鐘后，取上清液待測,。

3．不能檢測含NaN3的樣品,，因NaN3抑制辣根過氧化物酶的(HRP)活性,。

4．采集后盡早進行實驗，若不能馬上進行試驗,，可將標本放于-20℃保存,，但應(yīng)避免反復凍融。

試劑盒組成

自備物品

1 ,、 37 ℃ 恒溫箱

2 、 標準規(guī)格酶標儀

3 ,、 精密移液器及一次性吸頭

4 ,、 蒸餾水

5 、 一次性試管

6 ,、 吸水紙

操作步驟

1. 標準品的稀釋與加樣：在酶標包被板上設(shè)標準品孔 10 孔,，在*、第二孔中分別加標

準品 100μl,，然后在*,、第二孔中加標準品稀釋液50μl，混勻,；然后從*孔,、第二

孔中各取100μl分別加到第三孔和第四孔，再在第三,、第四孔分別加標準品稀釋液50μl,，

混勻；然后在第三孔和第四孔中先各取50μl棄掉,，再各取50μl分別加到第五,、第六孔

中，再在第五,、第六孔中分別加標準品稀釋液50ul,，混勻；混勻后從第五,、第六孔中各

取 50μl 分別加到第七,、第八孔中，再在第七,、第八孔中分別加標準品稀釋液 50μl,，混

勻后從第七、第八孔中分別取 50μl 加到第九,、第十孔中,，再在第九第十孔分別加標準

品稀釋液50μl，混勻后從第九第十孔中各取50μl棄掉,。(稀釋后各孔加樣量都為50μl,，

濃度分別為180ng/L,，120ng/L ，60ng/L,，30ng/L,， 15ng/L)。

2. 加樣：分別設(shè)空白孔(空白對照孔不加樣品及酶標試劑,，其余各步操作相同),、待測樣

品孔。在酶標包被板上待測樣品孔中先加樣品稀釋液40μl,，然后再加待測樣品10μl(樣

品zui終稀釋度為 5 倍),。加樣將樣品加于酶標板孔底部，盡量不觸及孔壁,，輕輕晃動混

勻,。

3. 溫育：用封板膜封板后置37℃溫育30 分鐘。    

4. 配液：將20倍濃縮洗滌液用蒸餾水20倍稀釋后備用

5. 洗滌：小心揭掉封板膜,，棄去液體,，甩干，每孔加滿洗滌液,，靜置 30 秒后棄去,，如此

重復 5次，拍干,。

6. 加酶：每孔加入酶標試劑50μl,，空白孔除外。

7. 溫育：操作同 3,。

8. 洗滌：操作同 5,。

9. 顯色：每孔先加入顯色劑 A50μl，再加入顯色劑 B50μl,，輕輕震蕩混勻,，37℃避光顯色

15 分鐘.

10. 終止：每孔加終止液50μl，終止反應(yīng)(此時藍色立轉(zhuǎn)黃色),。

11. 測定：以空白空調(diào)零,，450nm波長依序測量各孔的吸光度(OD值)。 測定應(yīng)在加終止

液后 15分鐘以內(nèi)進行,。

計算

    以標準物的濃度為橫坐標,，OD 值為縱坐標，在坐標紙上繪出標準曲線,，根據(jù)樣品的

OD值由標準曲線查出相應(yīng)的濃度,；再乘以稀釋倍數(shù)；或用標準物的濃度與OD值計算出標

準曲線的直線回歸方程式，將樣品的OD值代入方程式,，計算出樣品濃度,，再乘以稀釋倍數(shù)，

即為樣品的實際濃度,。

注意事項

1．試劑盒從冷藏環(huán)境中取出應(yīng)在室溫平衡15-30分鐘后方可使用,，酶標包被板開封后如未用完，板條應(yīng)裝入密封袋中保存,。

2．濃洗滌液可能會有結(jié)晶析出,，稀釋時可在水浴中加溫助溶，洗滌時不影響結(jié)果,。

3．各步加樣均應(yīng)使用加樣器,，并經(jīng)常校對其準確性，以避免試驗誤差,。一次加樣時間控制在5分鐘內(nèi)，如標本數(shù)量多,，推薦使用排槍加樣,。

4．  請每次測定的同時做標準曲線，做復孔,。如標本中待測物質(zhì)含量過高(樣本OD值大于標準品孔*孔OD值的),，請先用樣品稀釋液稀釋一定倍數(shù)(n倍)后再測定，計算時請zui后乘以總稀釋倍數(shù)(×n×5),。

5．  嚴格按說明書的操作進行,，試驗結(jié)果判定必須以酶標儀讀數(shù)為準.

6．本試劑不同批號組分不得混用。

7．封板膜只限一次性使用,，以避免交叉污染,。

8．所有樣品，洗滌液和各種廢棄物都應(yīng)按傳染物處理,。

9．底物請避光保存,。

檢測范圍：

7.5ng/L -250ng/L

保存條件及有效期

1．試劑盒保存：；2-8℃,。

2．有效期：6個月

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