大鼠TH17酶聯(lián)免疫分析(ELISA)試劑盒使用說明書
TH17酶聯(lián)免疫本試劑盒用于測定大鼠血清,，血漿及相關液體樣本中輔助信息細胞的TH17含量,。
實驗原理：
    本試劑盒應用雙抗體夾心法測定標本中大鼠 TH17水平。用純化的大鼠 TH17抗體包
被微孔板,，制成固相抗體,，往包被單抗的微孔中依次加入TH17，再與 HRP 標記的TH17抗
體結合,，形成抗體-抗原-酶標抗體復合物,，經(jīng)過*洗滌后加底物 TMB顯色。TMB在HRP
酶的催化下轉化成藍色,，并在酸的作用下轉化成zui終的黃色,。顏色的深淺和樣品中的 TH17
呈正相關。用酶標儀在 450nm 波長下測定吸光度(OD值)，通過標準曲線計算樣品中大鼠
TH17含量,。
TH17酶聯(lián)免疫試劑盒組成：
試劑盒組成 48孔配置 96孔配置 保存
說明書 1 份 1 份
封板膜 2 片(48) 2 片(96)
密封袋 1 個 1 個
酶標包被板 1×48 1×96 2-8℃保存
標準品：180pg/ml 0.5ml×1 瓶 0.5ml×1 瓶 2-8℃保存
標準品稀釋液 1.5ml×1 瓶 1.5ml×1 瓶 2-8℃保存
酶標試劑 3 ml ×1 瓶 6 ml ×1 瓶 2-8℃保存
樣品稀釋液 3 ml ×1 瓶 6 ml ×1 瓶 2-8℃保存
顯色劑A 液 3 ml ×1 瓶 6 ml ×1 瓶 2-8℃保存
顯色劑B 液 3 ml ×1 瓶 6 ml ×1 瓶 2-8℃保存
終止液 3ml ×1 瓶 6ml ×1 瓶 2-8℃保存
濃縮洗滌液 (20ml×20倍)×1 瓶 (20ml×30倍)×1 瓶 2-8℃保存
TH17酶聯(lián)免疫樣本處理及要求：
1. 血清：室溫血液自然凝固 10-20 分鐘,，離心 20分鐘左右(2000-3000 轉/分)。仔細收集上
清,，保存過程中如出現(xiàn)沉淀,，應再次離心。
2. 血漿：應根據(jù)標本的要求選擇 EDTA 或檸檬酸鈉作為抗凝劑,，混合 10-20 分鐘后,，離心
20分鐘左右(2000-3000 轉/分)。仔細收集上清,，保存過程中如有沉淀形成,，應該再次
離心。
3. 尿液：用無菌管收集,，離心 20分鐘左右(2000-3000 轉/分)。仔細收集上清,，保存過程
中如有沉淀形成,，應再次離心。胸腹水,、腦脊液參照實行,。
4. 細胞培養(yǎng)上清：檢測分泌性的成份時，用無菌管收集,。離心 20分鐘左右(2000-3000 轉/
分),。仔細收集上清。檢測細胞內(nèi)的成份時,，用PBS (PH7.2-7.4)稀釋細胞懸液,，細胞
濃度達到100 萬/ml 左右。通過反復凍融,，以使細胞破壞并放出細胞內(nèi)成份,。離心 20分
2
鐘左右(2000-3000 轉/分)。仔細收集上清,。保存過程中如有沉淀形成,，應再次離心。
5. 組織標本：切割標本后,，稱取重量,。加入一定量的PBS ，PH7.4,。用液氮迅速冷凍保存?zhèn)?br />用,。標本融化后仍然保持 2-8℃的溫度。加入一定量的 PBS (PH7.4)，用手工或勻漿器
將標本勻漿充分,。離心 20分鐘左右(2000-3000 轉/分),。仔細收集上清。分裝后一份待
檢測,，其余冷凍備用,。
6. 標本采集后盡早進行提取，提取按相關文獻進行,，提取后應盡快進行實驗,。若不能馬上
進行試驗，可將標本放于-20℃保存,，但應避免反復凍融.
7. 不能檢測含NaN3的樣品,，因NaN3抑制辣根過氧化物酶的(HRP )活性。
TH17酶聯(lián)免疫操作步驟
1. 標準品的稀釋與加樣：在酶標包被板上設標準品孔 10孔,，在*,、第二孔中分別加標
準品100μl，然后在*,、第二孔中加標準品稀釋液 50μl,，混勻；然后從*孔,、第二
孔中各取100μl 分別加到第三孔和第四孔,，再在第三、第四孔分別加標準品稀釋液50μl,，
混勻,；然后在第三孔和第四孔中先各取 50μl 棄掉，再各取 50μl 分別加到第五,、第六孔
中,，再在第五、第六孔中分別加標準品稀釋液50ul ,，混勻,；混勻后從第五、第六孔中各
取50μl 分別加到第七,、第八孔中,，再在第七、第八孔中分別加標準品稀釋液 50μl,，混
勻后從第七,、第八孔中分別取 50μl 加到第九、第十孔中,，再在第九第十孔分別加標準
品稀釋液50μl,，混勻后從第九第十孔中各取 50μl 棄掉,。(稀釋后各孔加樣量都為50μl，
濃度分別為 120pg/ml, 80pg/ml , 40pg/ml,20 pg/ml, 10pg/ml),。
2. 加樣：分別設空白孔(空白對照孔不加樣品及酶標試劑,，其余各步操作相同)、待測樣
品孔,。在酶標包被板上待測樣品孔中先加樣品稀釋液40μl,，然后再加待測樣品 10μl(樣
品zui終稀釋度為 5 倍)。加樣將樣品加于酶標板孔底部,，盡量不觸及孔壁,，輕輕晃動混
勻。
3. 溫育：用封板膜封板后置 37℃溫育30 分鐘,。
4. 配液：將 30(48T 的20倍)倍濃縮洗滌液用蒸餾水 30(48T 的20倍)倍稀釋后備用,。
5. 洗滌：小心揭掉封板膜，棄去液體,，甩干,，每孔加滿洗滌液，靜置 30秒后棄去,，如此
重復5 次,，拍干。
6. 加酶：每孔加入酶標試劑 50μl,，空白孔除外。
7. 溫育：操作同 3,。
8. 洗滌：操作同 5,。
9. 顯色：每孔先加入顯色劑 A50 μl，再加入顯色劑 B50μl,，輕輕震蕩混勻,，37℃避光顯色
15分鐘.
10. 終止：每孔加終止液 50μl，終止反應(此時藍色立轉黃色),。
11. 測定：以空白空調零,，450nm 波長依序測量各孔的吸光度(OD值)。 測定應在加終止
液后15分鐘以內(nèi)進行,。
TH17酶聯(lián)免疫注意事項：
1．試劑盒從冷藏環(huán)境中取出應在室溫平衡15-30 分鐘后方可使用,，酶標包被板開封后如未
用完，板條應裝入密封袋中保存,。
2．濃洗滌液可能會有結晶析出,，稀釋時可在水浴中加溫助溶，洗滌時不影響結果,。
3．各步加樣均應使用加樣器,，并經(jīng)常校對其準確性,，以避免試驗誤差。一次加樣時間
控制在5 分鐘內(nèi),，如標本數(shù)量多,，推薦使用排槍加樣。
4．請每次測定的同時做標準曲線,，做復孔,。如標本中待測物質含量過高(樣本OD值
大于標準品孔*孔的 OD值)，請先用樣品稀釋液稀釋一定倍數(shù)(n 倍)后再測定,，計
算時請zui后乘以總稀釋倍數(shù)(×n×5),。
5．封板膜只限一次性使用，以避免交叉污染,。
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6．底物請避光保存,。
7．嚴格按照說明書的操作進行，試驗結果判定必須以酶標儀讀數(shù)為準.
8．所有樣品,，洗滌液和各種廢棄物都應按傳染物處理,。
9．本試劑不同批號組分不得混用。
10.  如與英文說明書有異,，以英文說明書為準,。
計算：
以標準物的濃度為橫坐標，OD值為縱坐標,，      
在坐標紙上繪出標準曲線,，根據(jù)樣品的 OD          
值由標準曲線查出相應的濃度；再乘以稀釋        
倍數(shù),；或用標準物的濃度與 OD值計算出標        
準曲線的直線回歸方程式,，將樣品的 OD值        
代入方程式，計算出樣品濃度,，再乘以稀釋        
倍數(shù),，即為樣品的實際濃度。                                
試劑盒性能：
1. 樣品線性回歸與預期濃度相關系數(shù) R 值為0.95 以上,。
2. 批內(nèi)與批間應分別小于 9%和11%                                              
保存條件及有效期：
1. 試劑盒保存：,；2-8℃。
2．有效期：6 個月