產品名稱：人分泌成分(SC)ELISA試劑盒

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樣本處理及要求：
1. 血清：室溫血液自然凝固10-20分鐘,，離心20分鐘左右(2000-3000轉/分),。仔細收集上清，保存過程中如出現沉淀,，應再次離心,。
2. 血漿：應根據標本的要求選擇EDTA或檸檬酸鈉作為抗凝劑，混合10-20分鐘后,，離心20分鐘左右(2000-3000轉/分),。仔細收集上清，保存過程中如有沉淀形成,，應該再次離心,。
3. 尿液：用無菌管收集，離心20分鐘左右(2000-3000轉/分),。仔細收集上清,，保存過程中如有沉淀形成，應再次離心,。胸腹水,、腦脊液參照實行。
4. 細胞培養(yǎng)上清：檢測分泌性的成份時,，用無菌管收集,。離心20分鐘左右(2000-3000轉/分)。仔細收集上清,。檢測細胞內的成份時，用PBS(PH7.2-7.4)稀釋細胞懸液,，細胞濃度達到100萬/ml左右,。通過反復凍融，以使細胞破壞并放出細胞內成份,。離心20分鐘左右(2000-3000轉/分),。仔細收集上清。保存過程中如有沉淀形成,，應再次離心,。
5. 組織標本：切割標本后，稱取重量,。加入一定量的PBS,，PH7.4,。用液氮迅速冷凍保存?zhèn)溆谩吮救诨笕匀槐３?-8℃的溫度,。加入一定量的PBS(PH7.4),，用手工或勻漿器將標本勻漿充分。離心20分鐘左右(2000-3000轉/分),。仔細收集上清,。分裝后一份待檢測，其余冷凍備用,。
6. 標本采集后盡早進行提取,，提取按相關文獻進行，提取后應盡快進行實驗,。若不能馬上進行試驗,，可將標本放于-20℃保存，但應避免反復凍融.
7. 不能檢測含NaN3的樣品,，因NaN3抑制辣根過氧化物酶的(HRP)活性,。
操作步驟：
1. 標準品的稀釋與加樣：在酶標包被板上設標準品孔10孔，在*,、第二孔中分別加標準品100μl,，然后在*、第二孔中加標準品稀釋液50μl,，混勻,；然后從*孔、第二孔中各取100μl分別加到第三孔和第四孔,，再在第三,、第四孔分別加標準品稀釋液50μl，混勻,；然后在第三孔和第四孔中先各取50μl棄掉,，再各取50μl分別加到第五、第六孔中,，再在第五,、第六孔中分別加標準品稀釋液50ul，混勻,；混勻后從第五,、第六孔中各取50μl分別加到第七、第八孔中,，再在第七,、第八孔中分別加標準品稀釋液50μl，混勻后從第七,、第八孔中分別取50μl加到第九,、第十孔中,，再在第九第十孔分別加標準品稀釋液50μl，混勻后從第九第十孔中各取50μl棄掉,。(稀釋后各孔加樣量都為50μl,，濃度分別為120 ng/L ，80 ng/L,，40 ng/L,，20ng/L，10 ng/L),。
2. 加樣：分別設空白孔(空白對照孔不加樣品及酶標試劑,，其余各步操作相同)、待測樣品孔,。在酶標包被板上待測樣品孔中先加樣品稀釋液40μl,，然后再加待測樣品10μl(樣品zui終稀釋度為5倍)。加樣將樣品加于酶標板孔底部,，盡量不觸及孔壁,，輕輕晃動混勻。
3. 溫育：用封板膜封板后置37℃溫育30分鐘,。
4. 配液：將30(48T的20倍)倍濃縮洗滌液用蒸餾水30(48T的20倍)倍稀釋后備用,。
5. 洗滌：小心揭掉封板膜，棄去液體,，甩干,，每孔加滿洗滌液，靜置30秒后棄去,，如此重復5次,，拍干。
6. 加酶：每孔加入酶標試劑50μl,，空白孔除外,。
7. 溫育：操作同3。
8. 洗滌：操作同5,。
9. 顯色：每孔先加入顯色劑A50μl,，再加入顯色劑B50μl，輕輕震蕩混勻,，37℃避光顯色15分鐘.
10. 終止：每孔加終止液50μl,，終止反應(此時藍色立轉黃色),。
11. 測定：以空白空調零,，450nm波長依序測量各孔的吸光度(OD值)。 測定應在加終止液后15分鐘以內進行,。
注意事項：
1． 試劑盒從冷藏環(huán)境中取出應在室溫平衡15-30分鐘后方可使用,，酶標包被板開封后如未用完,，板條應裝入密封袋中保存。
2． 濃洗滌液可能會有結晶析出,，稀釋時可在水浴中加溫助溶,，洗滌時不影響結果。
3． 各步加樣均應使用加樣器,，并經常校對其準確性,，以避免試驗誤差。一次加樣時間控制在5分鐘內,，如標本數量多,，推薦使用排槍加樣。
4． 請每次測定的同時做標準曲線,，做復孔,。如標本中待測物質含量過高(樣本OD值大于標準品孔*孔的OD值)，請先用樣品稀釋液稀釋一定倍數(n倍)后再測定,，計算時請zui后乘以總稀釋倍數(×n×5),。
5． 封板膜只限一次性使用，以避免交叉污染,。
6． 底物請避光保存,。
7． 嚴格按照說明書的操作進行，試驗結果判定必須以酶標儀讀數為準.
8． 所有樣品,，洗滌液和各種廢棄物都應按傳染物處理,。
9． 本試劑不同批號組分不得混用。
10. 如與英文說明書有異,，以英文說明書為準,。
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