中文名稱:小鼠血小板反應蛋白/凝血酶敏感蛋白1(TSP-1)ELISA試劑盒
英文簡稱:Mouse thrombospondin 1,TSP-1 ELISAKit
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ELISA實驗條件:加樣,包被物質(zhì)及其濃度
加樣:在ELISA中除包被外,,一般需要進行4-5次加樣.在定性測定中有時不強調(diào)加樣量的準確性,,例如規(guī)定為加樣一滴,,此時應該使用相同口徑的滴管,保持準確的加液姿勢,,使每滴液體的體積基本相同.在定量測定中加樣量力求準確.標本和結(jié)合物的稀釋液應按規(guī)定配制.加樣時應將液體加在孔底,,避免加在孔壁上部,并注意不可出現(xiàn)氣泡.
包被物質(zhì)及其濃度:在ELISA中,,將抗原或抗體固定在載體表面,,稱為固想的包被或包埋,固想包被的質(zhì)量直接關(guān)系到酶免疫測定法的測定結(jié)果.理想的包被應該是:固相表面應該吸附盡可能多的特異抗體(或純抗原物質(zhì)),;吸附應較牢固,,能耐受數(shù)次洗滌;非特異性吸附作用要?。唧w操作中應考慮下述因素:包被物質(zhì)及包被濃度,,包被緩沖液的pH及離子強度,包被溫度,,時間及洗滌等.
抗原或抗體吸附于固相,,吸附能力有差異.固相包被的機制有三種:*種是物理性吸附,即抗原或抗體通過物理力被動地吸附于疏水性固相載體的表面,,物理性吸附的過程較簡單,,不發(fā)生化學反應,不需特殊條件,,適用于多種類型和型式的載體,,如聚苯乙烯試管及酶標板凹孔,纖維素膜等,,目前使用zui廣泛,; 第二種是共價交聯(lián),先讓物理惰性物質(zhì)(固相)接上化學性質(zhì)活潑的基團,,通過該基團再把抗原或抗體與固相載體交聯(lián),,引入的活性基團常 為戊二醛.濾紙亦可作為固相,,先用溴化氰激活紙質(zhì)纖維素,,再與抗體交聯(lián),用化學交聯(lián)法制得的固相,,其吸收容量大,,批號之間的差異小,而且價格低廉,,用共價法交聯(lián)可能是固相包被標準化的*途徑,; 第三種是交聯(lián)于蛋白質(zhì),應用極少.
固相抗體與固相表面的吸附是通過物理作用.糖蛋白類物質(zhì)如癌胚抗原,血型物質(zhì),,脂蛋白,,細菌脂多糖,糖脂及變性DNA,,均可吸附于聚苯乙烯塑料表面,,而天然DNA,中性多糖用于包被塑料固相表面的效果不佳或背景著色深.有人認為聚苯乙烯吸附抗原好,,聚乙烯吸附抗體效果好.有一些預處理固相板的方法可以改善吸附,,如廠家用射線照射,使用者用乙酸,,鹽酸,,戊二醛或多聚賴氨酸處理板.用戊二醛和鹽酸預處理板不僅促進吸附,還能降低非特異性反應,,用多聚賴氨酸可增強某些多糖抗原的吸附.更多介紹詳情請咨詢.
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