ELISAS實驗血清的制備

（2）抗血清的制備

 ① 所需的抗原量   一般1-10mg/mL,。

②免疫途徑   抗原的注射方法有皮下注射,、肌肉注射,、腹膜內(nèi)注射、靜脈注射和淋巴結(jié)注射等,。其中以靜脈注射zui為簡單方便,，不需要佐劑乳化，產(chǎn)生抗體的高峰值出現(xiàn)較早,，一般在一周左右,，注射后一周即可采血測試效價。免疫過程中應(yīng)注意：a.佐劑只能現(xiàn)配現(xiàn)用：b.采血時間不宜拖得太長,。因為免疫時間越長,，產(chǎn)生交叉反應(yīng)的抗體也越多。

③抗血清的分離   當(dāng)?shù)玫綕M意的效價時,，即可進(jìn)行取血,。將收集到的血液成斜面放置在37℃、溫箱中2h,。然后置于4℃冰箱過一夜,。次日用滴管吸取抗血清，用離心法（2000-3000r/min,20min）去掉沉淀,。然后測定效價,、鑒定純度。純度用紫外分光光度計或Folin氏比色法進(jìn)行測定,?？寡灞４嬗?25℃低溫處。

 ④抗血清的效價測定    測定的方法一般有兩種,，即試管沉淀法和免疫雙擴(kuò)散法,。對于免疫酶技術(shù)使用的抗血清，必須具有一定的效價,，試管沉淀法應(yīng)不低于1:2,，免疫雙擴(kuò)散法不低于1:2,，且要求單價抗血清。

 （3）捕食者的收集和準(zhǔn)備     主要方法有3個：①將胃內(nèi)含物擠在質(zhì)量好的濾紙上,，但蛋白質(zhì)易與纖維素結(jié)合,，若保存過久則難以洗脫：②將待檢查的捕食封閉在明膠膠囊內(nèi)，并加干燥劑,，以使蟲體與膠囊分離：③盡可能快地將采集到的捕食者儲存于低溫下（如-40℃）,。前兩種方法適于郵寄和長途運輸，后一種方法能保存較長的時間,。所有的方法都需保持干燥,。對較大的捕食者，可將消化道分離,，像蟻,、蝸牛以及蜘蛛等小型動物則整個蟲體。（4）酶聯(lián)抗體的制備  按戊二醛簡易法進(jìn)行,。